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背景 在HPV相关肿瘤中,高危型HPV感染,是受染细胞发生恶性转化的必要条件。超过一半的HPV相关肿瘤与HPV 16相关。本课题组前期试验证明人类乳头瘤病毒HPV16E6、E7与DNA甲基转移酶(DNMTs)相关,引起6种抑癌基因(SPARC、TFPI2、RRAD、SFRP1、MT1G 和 NMES1)甲基化发生相应的改变,进而引起基因表达改变,最终可能参与细胞的恶性转化过程。DNMTs主要包括DNMT1和DNMT3,前者主要参与甲基化状态的维持,也是非CpG位点从头甲基化所必需,并与甲基化状态的延伸有关;后者包括DNMT3a、DNMT 3b和DNMT3L。DNMT3a和3b是主要的从头甲基化酶。人们认为DNMT3L不直接参与DNA甲基化,但其与DNMT3a和3b相互作用,可能在转录抑制中发挥作用。。前期研究中我们发现,将SiHa细胞株(HPV16阳性)中的E6、E7基因分别沉默后,4种DNMTs的表达水平均有所下降,但下降程度存在明显差异。而将HPV16 E6、E7同时转入原代角质形成细胞后,在细胞永生化的过程中,4种DNMTs的表达水平也存在不同程度的升高。我们据此假设,除了传统认为的不同功能之外,DNMTs在调控目的基因的甲基化状态时,可能有(相对)关键的DNMT存在。目的本研究拟采用SiHa细胞,应用特异性siRNA沉默DNMT1,观察DNMT1和6种抑癌基因的mRNA表达水平以及DNMT1蛋白表达水平的变化。方法应用针对DNMT1的siRNA,沉默DNMT1。应用qPCR比较沉默前后不同时间点DNMT1的mRNA和蛋白表达的变化,以及6种目的基因的mRNA表达水平的变化。结果转染siRNA后,DNMT1 mRNA和蛋白水平表达下调(p<0.05)。6种目的基因的mRNA表达上调(p<0.05)结论DNMT1对SiHa细胞中的6种目的基因的mRNA表达可能起抑制作用。