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目的:利用高脂饮食联合腹腔注射猪血清建立小鼠脂肪性肝纤维化模型,在此模型的基础之上,研究木瓜提取物对小鼠肝脏的预防保护作用,初步探究其抗脂肪性肝纤维化的作用机制。 方法:取雌雄各半的BABL/C小鼠48只,4-6周龄,将其随机分为四组,每组12只,即正常对照组,模型组对照组,木瓜提取物低(100mg·kg-1)、高(300mg·kg-1)剂量组。除了正常对照组给予普通饲料外,其余各组均给予高脂饲料造模,与此同时,木瓜提取物低、高剂量组分别给予100mg·kg-1、300mg·kg-1木瓜提取物灌胃,持续10周。除了正常对照组以外,其余各组小鼠均从第五周开始腹腔注射猪血清,持续3周。末次给药并禁食12h后,称取并记录小鼠最终的体重,将其处死。(1)每周记录上述各组小鼠的体重,每日观察并记录小鼠饮食、饮水量,行为及形态变化,处死后,观察并记录肝脏组织的形态和重量变化。(2)测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性和甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、总胆汁酸(TBA)的含量。(3)采用羟脯氨酸试剂盒检测肝组织羟脯氨酸的含量。(4)小鼠肝脏HE染色,光镜下观察肝脏的病理学变化。(5)小鼠肝脏Masson染色法,光镜下观察肝组织的纤维化严重程度。(6)小鼠肝脏电镜观察肝组织的超微结构的变化。(7)PCR技术观察木瓜提取物对肝组织COL1A1、TIMP-1、α-SMA、IRE1、ATF6及eIF2α基因表达的影响。(8)Western Blot技术观察木瓜提取物对肝组织COL1A1、IL-1β、TNF-α、GRP78、JNK、p-JNK、GSK-3β、p-GSK-3β、p-AMPK、SIRT1、SIRT3及PGC-1α蛋白表达的影响。 结果:(1)与正常对照组相比,模型对照组均能显著地升高小鼠每日摄食量、饮水量、每周体重、终体重、净增长体重、体重增长率、肝重及肝指数,说明模型成功,木瓜提取物低、高剂量组均能改善小鼠的一般情况;肝脏取材外观观察比较发现模型对照组相较于鲜红、表面光滑无颗粒、界限清晰的正常对照组,其色浅偏白、表面粗糙有细小白色颗粒,木瓜提取物低、高剂量组小鼠肝脏外观有明显改善,接近于正常。(2)血清肝功能检测中,木瓜提取物低、高剂量组均能在一定程度上降低ALT、AST的活性和TG、LDL、TBA的含量(P<0.05),升高HDL的含量(P<0.05)。(3)木瓜提取物低、高剂量组的肝组织中羟脯氨酸含量明显减少(P<0.05)。(4)HE染色光镜下观察发现,木瓜提取物低、高剂量组小鼠肝脏小叶结构清晰,肝索排列较整齐,在中央静脉周围呈放射状排列,肝细胞脂肪变性和炎性细胞的数量均显著减少。(5)Masson染色光镜下观察发现,木瓜提取物低、高剂量组明显的抑制了胶原纤维的产生,仅见少量的或者细小的蓝色纤维穿梭在小血管周围。(6)投射电镜观察发现,木瓜提取物低、高剂量组的肝细胞中脂滴明显减少,内质网、线粒体等细胞器数量增多。(7)木瓜提取物低、高剂量组可以明显的降低COL1A1、TIMP-1、α-SMA、IRE1、ATF6及eIF2α基因的表达。(8)木瓜提取物低、高剂量组能明显的降低COL1A1、IL-1β、TNF-α、GRP78、p-JNK、p-GSK-3β蛋白的表达和升高GSK-3β、p-AMPK、SIRT1、SIRT3及PGC-1α蛋白的表达。 结论: 1.高脂饮食(10周)联合腹腔注射猪血清(3周)可建立稳定的小鼠脂肪性肝纤维化模型,本方法成熟可靠,简单易行; 2.木瓜提取物可改善脂肪性肝纤维化小鼠的肝功能、肝组织病理学改变及肝脏纤维形成的情况,对脂肪性肝纤维化具有预防保护作用; 3.木瓜提取物抑制脂肪性肝纤维化的作用机制可能与其调节SIRT1/SIRT3通路,改善内质网应激,抑制炎症反应,从而抑制胶原纤维的合成,增加其降解,干预脂肪性肝纤维化进程。