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背景阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种常见的以记忆损害和认知障碍为主要临床表现的神经退行性疾病,神经炎性斑是其特征性病理表现之一。AD发病机制尚未完全清楚,但随着相关研究的深入,其发生的神经炎症机制受到越来越多学者的重视。Aβ1-42(β-amyloid protein1-42, Aβ1-42)是神经炎性斑的主要成分,在小胶质细胞的浸润、活化并大量释放炎性细胞因子如白细胞介素1β(Interleukin-1β, IL-1β)、肿瘤坏死因子α (Tumor necrosis factor, TNF-α)等方面可能起着重要作用,其中可溶性Aβ1-42寡聚体的促炎作用可能更为重要。这些炎症因子可以对神经元造成炎性损伤,从而导致AD发生。海风藤是胡椒科植物风藤的干燥藤茎,具有抗炎镇痛作用。本实验目的是观察可溶性Aβ1-42寡聚体对小胶质细胞释放炎性介质的影响及海风藤提取物的干预作用,为进一步阐明AD神经炎性损伤的机制及发现有效的药物防治措施奠定理论基础。目的观察蛋白水平上Aβ1-42寡聚体对小胶质细胞IL-1β、TNF-α表达的影响,以及海风藤提取物对此过程的干预作用。探讨体外稳定存在的寡聚体Aβl-42的制备方法。方法1.小鼠源小胶质细胞的复苏、传代、冻存及观察；2.Aβ1-42寡聚体的研制并观察其稳定性；3.将小鼠源小胶质细胞随机分为三组：空白对照组、寡聚体Aβ1-42组(给予Aβ1-42寡聚体)、寡聚体Aβ1-42+海风藤提取物组(在给予Aβ1-42寡聚体的基础上加用海风藤提取物干预)。按实验要求作用48小时后,采用免疫蛋白印迹法(WesternBlot)检测各组小胶质细胞IL-1p、TNF-a的蛋白表达量。结果1.显微镜下观察体外培养的小胶质细胞,静息态时呈细长分枝状,受刺激后呈阿米巴样。2.电镜观察在40℃冰箱存放2周后的寡聚体Aβ1-42结果：寡聚体Ap1-42在透射电镜下以单体形式存在,未发现纤丝状物质形成,形态为颗粒形或球形,大小比较均一,直径约为15～30nm。3. Western-blot检测各组小胶质细胞IL-1β、 TNF-α的蛋白表达量结果显示：Aβ1-42寡聚体组IL-1β、 TNF-α蛋白表达量分别为83.3±8.5、32.0±3.6,较空白对照组25.2±13.9、2.6±1.7明显增加(t=7.46、11.74,均P=0.000),差异具有统计学意义；Aβ1-42寡聚体+海风藤提取物组IL-1p、TNF-a蛋白表达量分别为59.3±2.7、21.7±4.5,较Aβ1-42寡聚体组明显减少(t=3.08、4.38, P=0.022、0.005),差异具有统计学意义。结论1.Aβ1-42寡聚体能够激活小胶质细胞、并增加IL-1β、 TNF-α蛋白的表达量,海风藤提取物能够明显抑制小胶质细胞的活化,降低小胶质细胞炎性因子的表达量。2.该实验成功制成了能稳定存在的Aβ1-42寡聚体,模拟了AD脑内的微环境。