论文部分内容阅读
前言: 牙本质是由以羟基磷灰石为主体的矿化基质(无机基质)和以胶原纤维为主体的非矿化基质(有机基质)构成。经典的牙本质粘接中常应用磷酸(PhosPhoric acid,PA)、乙二胺四乙酸溶液(Ethylene Diamine Tetraacetie Acid,EDTA)等对牙本质脱矿,部分溶解牙本质表面的矿化基质,使牙本质粘接剂得以在暴露的胶原纤维基质中渗透并固化形成混合层,通过牢固的微机械锁结获得强大的粘接力。这是现代牙本质粘接技术的基础。 大量研究表明,过短的脱矿时间往往造成牙本质胶原纤维基质暴露不充分,过长的脱矿时间则使深部牙本质暴露的大量胶原基质无法被粘接剂完全渗透包被,形成纳米渗漏,导致即刻或远期粘接效果下降。此外,酸蚀脱矿还可以激活牙本质基质中的基质金属蛋白酶(MMP)前体,造成界面胶原降解破坏,影响牙本质粘接界面的长期稳定性。因此,适宜的粘接前脱矿时间是临床获取可靠粘接力和维持粘接界面长期稳定的关键。 目前,临床常以37%PA酸蚀牙本质15s或17%EDTA处理牙本质60s以获取足够的即刻粘接力。尽管这一粘接前脱矿处理使牙本质粘接强度显著提升,但不同粘接前脱矿时间对牙本质矿化基质的溶解及脱矿暴露胶原基质的酶解稳定性的影响却缺乏深入研究。 目的: 本研究拟从牙本质矿化基质溶解效率及胶原基质酶解稳定性两个角度,探讨37%PA和17%EDTA两种常用脱矿剂在不同的粘接前脱矿时间下对牙本质无机基质和有机基质稳定性的影响,为临床进一步确定粘接前脱矿处理时间提供理论依据。 方法: 1、建立两种脱矿剂不同程度脱矿牙本质基质的实验模型,以对比PA和EDTA对牙本质的脱矿速率,明确牙本质脱矿的钙、镁、磷的释放量。主要方法为:获取因阻生或正畸需要拔除的正常无龋人第三恒磨牙及双尖牙,组织匀浆机制备牙本质粉。取等量牙本质粉分别以 37%PA 与 17%EDTA 进行脱矿处理。依照不同时相点分别脱矿10s、15s、30s、60s、90s、120s、24h、48h、72h,另以去离子水作为阴性对照离心并荡洗。取脱矿上清液检测计算两种脱矿液的脱矿效率并绘制动力学曲线。 2、基于以上实验的基础,建立脱矿牙本质基质胶原纤维酶解1d、7d的实验模型,以比较两种脱矿剂对脱矿牙本质胶原基质胶原纤维酶解造成的影响,阐明两种脱矿剂对部分脱矿牙本质基质胶原纤维稳定性的影响。主要方法为:制取等量人牙本质粉,分别以 37%PA 与 17%EDTA 脱矿处理 10s、15s、30s、60s、90s、120s、24h、48h、72h后离心荡洗。取脱矿上清液100ul用羟脯胺酸(HYP)试剂盒测定HYP值,并绘制胶原溶脱变性的变化趋势图。取脱矿样本沉淀,用1.0g/l Ⅰ型胶原酶溶液300ul酶解,于1d、7d用羟脯胺酸(HYP)试剂盒测定并绘制胶原降解1d、7d的变化趋势图。 3、根据上述研究数据结果,计算脱矿牙本质基质胶原纤维酶解7d比酶解1d释放HYP增加量(降解增量),利用Pearson相关性分析可获得脱矿总量与胶原溶脱变性、酶解1d胶原降解量、酶解7d胶原降解量及酶解增量之间的相关函数关系,以明确脱矿剂及脱矿时间对脱矿牙本质基质胶原纤维稳定性的影响。主要方法为:根据两种表面处理剂对牙本质处理不同时间,推测出该部分脱矿牙本质基质胶原纤维的稳定性。综合两种脱矿剂表面处理牙本质各时间点的脱矿总量,获得部分脱矿牙本质基质胶原纤维的稳定性。 结果: 1、就牙本质无机基质脱矿效率而言,PA脱矿10-15s时即可显著脱矿(P>0.05);而与PA脱矿反应较为迅速高效相比,EDTA的螯合脱矿反应缓慢持续,60s可见较明显脱矿(P<0.05),90s-120s呈现一个平台期。 2、就部分脱矿牙本质胶原基质的溶脱变性与降解而言,PA 组胶原溶脱变性量10s-30s急剧增加(P<0.05),随着时间进一步延长无显著变化(P>0.05),各脱矿时间牙本质胶原基质酶解后胶原降解量无明显差异(P>0.05);EDTA 组胶原溶脱变性在120s内无显著变化(P<0.05),酶解量随脱矿时间增长而增加(P<0.05),30s后开始降低(P<0.05)。 3、就部分脱矿牙本质胶原基质的稳定性而言,PA处理后牙本质胶原基质的降解增量均小于未处理牙本质,而EDTA处理后牙本质胶原基质的降解增量均大于未处理牙本质。经Pearson相关性分析,PA组:降解增量自15s后降低(P<0.05),脱矿总量与胶原溶脱变性量强相关(P<0.05),脱矿量与胶原降解增量强相关(P<0.05),脱矿量与酶解7d后释放HYP量强相关(P<0.05)。EDTA组:降解增量自60s开始降低(P<0.05),脱矿总量与胶原溶脱变性量强相关(P<0.05)。 结论: 1、PA脱矿时间延长,脱矿量缓慢增加,胶原溶脱变性量越多,脱矿后牙本质胶原基质的稳定性增强,PA处理15s后随作用时间延长,脱矿后牙本质胶原基质的稳定性增强,;EDTA随脱矿时间延长脱矿量持续增加,胶原溶脱变性量缓慢增加,EDTA处理60s后随作用时间延长,脱矿后牙本质胶原基质的稳定性增强。 2、PA脱矿效率迅速高效、胶原脱溶率高及脱矿后牙本质胶原基质的稳定性好,而EDTA脱矿效率缓慢持续、胶原脱溶率低及脱矿后牙本质胶原基质的稳定性尚可。就脱矿效率及脱后牙本质胶原基质稳定性而言,临床进行牙本质粘接前表面处理牙本质时,PA更具有优势。 3、从脱矿效率、胶原溶脱变性率及脱矿后牙本质胶原基质稳定性三个角度而言,临床进行牙本质粘接前表面处理牙本质时,以37%PA酸蚀10-15s或17% EDTA表面处理60-90s为较合理。