目的(1)研究在鸡卵白蛋白(OVA)和脂多糖(LPS)致敏激发的中性粒细胞性哮喘小鼠模型上,汉黄芩素(汉黄芩素)能否抑制哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性;(2)体外探讨汉黄芩素是否通过诱导中性粒细胞凋亡及抑制气道平滑肌细胞迁移,改善中性粒细胞性哮喘气道炎症及重塑。方法BALB/c小鼠随机分组:正常组、中性粒细胞性哮喘组、汉黄芩素不同剂量组、地塞米松组(Dex组)和溶剂对照组(DMSO组),每组8只。小鼠哮喘模型于第0、1、2和7天经鼻滴入20 μL磷酸盐缓冲液PBS(含OVA 75μg和LPS 10μg)致敏,第14、15、21、22天开始经鼻滴入20 μL PBS(含OVA 50μg)激发小鼠哮喘发作。处理组于OVA溶液经鼻激发前30 min,分别腹腔注射地塞米松(10 mg/kg)、汉黄芩素(30、40、50 mg/kg)及DMSO溶液各200μL,正常组以等量PBS代替OVA和LPS经鼻滴入。末次激发24h后,评估小鼠气道炎症及高反应性。分离人外周血中性粒细胞,25、50、75、100μM汉黄芩素作用6h后,通过细胞形态学、流式细胞术检测细胞凋亡,采用蛋白质印迹法(western blot)检测cleaved-caspase3、cleaved-caspase8表达水平。人气道平滑肌细胞株常规传代培养于含2%FBS、100 U/mL青霉素和100 mg/L链霉素的SMCM培养基中,采用CCK-8和EDU染色分析细胞增殖情况,划痕和迁移实验用于评估汉黄芩素对气道平滑肌细胞迁移的影响,western blot检测ERK、JNK和Akt蛋白磷酸化水平。结果(1)汉黄芩素减轻哮喘小鼠气道中性粒细胞浸润及降低肺组织炎症因子TNF-α和IL-6的表达,改善哮喘小鼠气道高反应性,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)汉黄芩素浓度依赖性诱导中性粒细胞凋亡,并呈现相应形态学变化,与对照组相比,cleaved-caspase3(cc3)、cleaved-caspase8(cc8)表达水平明显增加,促凋亡作用可被半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶抑制剂Q-VD-OPh和z-VAD-fmk抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)汉黄芩素降低哮喘小鼠肺泡灌洗液(BALF)及肺组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达,抑制HMGB1诱导平滑肌细胞增殖和迁移,EDU染色观察汉黄芩素处理组细胞增殖明显减少,迁移和划痕实验结果显示,与HMGB1组(500 ng/mL)相比,汉黄芩素抑制细胞迁移,部分逆转HMGB1引起的ERK、JNK和Akt蛋白磷酸化水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论汉黄芩素对中性粒细胞性哮喘的治疗作用可能与其诱导中性粒细胞凋亡及抑制气道平滑肌细胞迁移等有关。