Lipin1基因在机体内具有一系列重要的生理功能。Lipin1基因是一种编码Mg2+依赖性的磷脂酸(PA)磷酸化酶的基因。在人和鼠的研究表明Lipin1基因能引起脂肪沉积的剧烈变化,Lipin1基因对脂肪沉积的效应在转基因过量表达小鼠和自然人群中的研究却得到相反的结论,有必要以其它模式动物为对象进行该基因在自然群体中对脂肪沉积的效应作进一步研究。比较基因组学的分析表明鸡Lipin1基因也应是影响鸡脂肪沉积的潜在候选基因。目前,仅对鸡Lipin1基因的克隆及序列多态性分析进行了相关研究,而在其它方面没有任何报道,故本试验开展了对鸡Lipin1基因差异表达的相关研究工作。为了研究鸡Lipin1基因在不同能量水平饲粮间的表达差异及其mRNA可变剪接形式,本试验主要从以下两个方面进行研究。试验一、鸡Lipin1基因mRNA可变剪接形式研究1、筛选用于表达差异的引物及对应扩增产物组织特异性研究本试验以成年纯系丝毛乌骨鸡为研究对象,在筛选鸡Lipin1基因定量分析引物的过程中,通过RT-PCR技术获得了鸡Lipin1基因的两种可变剪接形式鸡Lipin1-β和鸡Lipin1-γ,对应引物分别为LP1和LP2,这是由于Lipin1基因在转录过程中由于内含子贮留而引起的。鸡Lipin1-β基因预测一个编码937bp氨基酸的蛋白,鸡Lipin1-γ基因预测一个编码918bp氨基酸的蛋白。鸡Lipin1-β基因仅在心脏和胸肌组织中表达,而在其它组织中没有表达。鸡和鼠的转录产物Lipin1-β编码序列同源性为72.10%,蛋白同源性为87.37%。鸡Lipin1-γ基因在肺脏、脾脏、脂肪、心脏、肝脏和软骨组织中表达量较高,在胸肌和脑组织中表达量次之,在胰脏组织中表达量最弱。经过试验筛选出用于鸡Lipin1基因组织表达及定量分析的引物为LP3,通过RT-PCR扩增出特异性产物,该引物达到后续试验要求的条件。2、利用半定量RT-PCR技术检测鸡总Lipin1基因在不同组织中的表达差异研究为了检测鸡总Lipin1基因在不同组织中的表达差异,本试验以成年纯系丝毛乌骨鸡为研究对象,利用半定量PCR检测鸡总Lipin1基因在肝脏、脂肪等9个组织中的mRNA的相对含量。结果显示,在所有组织中都可以检测到该基因的表达,在肺脏、脾脏、脂肪、心脏、胸肌、脑和肝脏组织中有较高的表达水平,在胰脏和软骨组织中表达量比较低。试验二、利用荧光定量PCR检测鸡Lipin1基因在不同能量水平饲粮间的表达差异研究本试验以爱拔益加肉鸡能量限制资源表达群体为研究对象,利用荧光定量PCR检测分别在肝脏和脂肪组织中鸡Lipin1基因在不同能量水平饲粮间的表达差异。结果显示,肝脏组织中鸡Lipin1基因在能量限制组的表达量极显著高于自由采食组(p<0.01),能量限制组表达量是自由采食组的4.4倍;脂肪组织中鸡Lipin1基因在能量限制组的表达量显著高于自由采食组(p<0.05),能量限制组表达量是自由采食组的3.8倍。在肝脏组织中进行鸡Lipin1基因表达水平与表型指标及生理生化指标的关联分析,通过分析可以看出鸡Lipin1基因表达量与料重比、腹脂重均呈显著的负相关关系(p<0.05),与腹脂率呈极显著的负相关关系(p<0.01);而与体重、平均日增重和皮下脂肪厚无显著的相关(p>0.05)。鸡Lipin1基因表达量与血清中高密度脂蛋白(HDL-C)和碱性磷酸酶(AKP)含量均呈显著的负相关关系(p<0.05),与总胆固醇(CHO1)含量呈极显著的负相关关系(p<0.01),与尿酸(UA)含量呈极显著的正相关关系(p<0.01);而与血清中葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)、血尿素氮(BUN)、乳酸脱氢酶(LDH)、CHO/HDL、CHO-HDL、胰岛素(INS)含量无显著的相关(p>0.05)。本研究通过对鸡Lipin1基因在不同能量水平饲粮间的表达差异及其mRNA可变剪接形式进行研究,可为进一步研究鸡Lipin1基因的功能及阐明鸡脂肪沉积的分子机理奠定了基础。