树突状细胞（DC）是机体内最重要的一群专职性抗原递呈细胞（APC），也是机体免疫应答的有力启动者。近年来，随着DC的功能和生物学特性被不断认识，DC在肿瘤免疫、移植免疫和抗感染免疫等方面日益受到人们的重视，被运用于B细胞淋巴瘤、黑色素瘤、前列腺癌、转移性肾癌和多发性骨髓瘤等恶性肿瘤的临床尝试性治疗，并取得了令人鼓舞的疗效。 DC的前体细胞来源于骨髓造血干细胞，继而这些前体细胞经血流到达外周组织，分化为幼稚的DC。这些DC可以通过胞吞作用摄取入侵的抗原物质，加工、处理成小分子的多肽片段，再把这些多肽片段与MHC分子结合，表达在细胞表面，然后DC离开抗原入侵的部位，进入淋巴组织，定居于淋巴结的T细胞区。在迁移的过程中，DC发生一系列的变化，逐渐失去摄取抗原的能力，上调表达协同刺激分子。成熟的DC在淋巴结与T细胞相互作用，其表面的抗原肽-MHC分子复合物被T细胞表面受体（TCR）识别产生抗原特异性信号，同时DC胞膜上表达的协同刺激分子与T细胞表面的相应分子 摘 要 结合，给T细胞提供协同刺激信号。此外，DC还分泌一些细胞因子，如 IL． 12、ILl、IL七等，使T细胞进一步活化、增殖和产主针对相应抗原的细胞 免疫应答。这一系列复杂而精细的过程，是在一些生物因子的作用下完成的， 因此进一步探讨调节DC分化、生长和成熟的生物因子和影响因素及其机制， 将有助于DC为佐剂的生物治疗的开展。 一．细胞因于对DC ｛E＠fd＆的峨 由于 DC在外周血的含量极低（仅占单个核细胞总数的 0．5l％人 sot分 离纯化，不能满足DC的实验研究及临床应用的需要，如何在体外大量扩增DC 一直是DC研究的热点。本研究首先比较了INF仓、FL、sCD40L、gp 130等 不同细胞因子对DC的诱导扩增效应，通过对所扩增DC的数量、细胞表型、 激发同种混合淋巴细胞反应的能力、分泌的 ILl 的含量、抗原摄取能力、 对 T细胞的趋化能力及对 IL刁 的桔抗效应的测定和分析，为进一步探讨 DC 体外诱导扩增的优化方案寻找可行的细胞因子组合。结果显示：＊）SCD4（） 和TNF仓都具有促进n姚、成抉的能力，可以有效地使DC上调表达协 同刺澈分子CD80、CD86并进而促进DC激发T细胞槽殖和活化的功能，但 在体外培养嫡中，sCD40L能有℃凶妨奇肮thlo的扔啼赔①宽，而TNF｛则明 显不如SCD40L舰。Q）激发型gp130单克隆抗体和人重组F’L可以显著地 促进DC的助洲，但是无明显地促进DC分 熟和促进DC激发T细胞 的功能。Q）经sCD40L和TNFa tX）8的DC均脐撇衅的IL－12， 抗原摄取删明显下降，对T淋巴细胞的趋化作用显著增强，以SCD40L的作 用强于TNFa。sCD40L在体外激发扩增DC以及以DC为主体的肿瘤免疫治 疗中具有独特的作用。 H．Y燃对DC生物学效应的作用 一定剂量的电离辐射可以对机体的多种器官和细胞产生损伤作用，而长期 4 摘 要 以来电离辐射对DC的损伤效应被人们所忽视，己有研究表明，电离辐射所 致恶性疾病的发生可能与DC数量或功能的改变有关。因此我们探讨了Y射 线对DC体外分化成熟及功能的影响，获得如下几个方面的结果：O）可射 线照射抑制DC M体外槽阻，显看地下调DC表这GM－CSFRm 和gP130分 子，但能上调＊C表达CD so、CD 86和＊L中＊R分于；Q）可射线照射增强 ＊C汲发T细胞的增殖；o）可射线照射能抑制＊C对抗原摄取的敝。在实 验中我们首次发现经过照射的DC上调性表达协同刺激分子，同时也可以相 应地提高DC对T细胞的激发作用。因此，电离辐射可以促进DC的成熟， 其在免疫应答中的作用及可能性机制值得进一步探讨。 三．DC懒怖增的优化方案 通过对上述结果的综合分析，我们建立了在体外以GM（SF、IL＊、FL 和 SCD40L为组合的诱导扩增DC的优化方案，并在此基础上，进一步研究了 无血清培养基对DC分化发育的影响。实验结果表明，经无血清培养基诱导 扩增的DC的成熟度可能不够。鉴此，如何进一步优化无血清培养基条件： 如再添加一些必要的细胞因子如 Ah、PGEZ、IFN叶等或适量的自体血浆， 人AB型血清，值得进一步研究。 完善的DC诱导和培养体系是DC研究和应用的基础。为了有效地扩增DC 并增强其生物学功能，寻找合适的细胞因子配伍及应用顺序具有重要的应用 价值。本研究在探讨各种细胞因子及不同剂量的电离辐射对DC的生物学效 应的基础上，建立了人?