背景/目的 肝衰竭是内科治疗的难点，其死亡率高达80％以上。原位肝移植技术（OLT）虽能大大提高患者成活率，但因供体少，多数病人在等待OLT时死亡。此外肝脏具有极强的再生能力，病人如能度过急性期，待肝脏再生后可望能恢复。因此人工肝的临床意义在于提高患者的生存质量，有条件接受、等待OLT或提高OLT的存活率；支持部分患者度过急性期，减少并发症，自行恢复好转。本文拟在前期工作的基础上，构建透析型杂合人工肝装置，并在自行建立的犬急性肝衰竭模型上评价其治疗作用，总结前期的血液灌流型杂合人工肝与透析型杂合人工肝的异同点及其临床适应范围，为人工肝临床应用提供方法和理论基础。 1.乳猪肝细胞大量培养术 （1）目的 改进常用的肝细胞手工震荡粘附培养技术，提高肝细胞粘附率。方法 使用磁力悬浮培养容器使肝细胞轻度聚集，然后加入微载体培养，控制在低转速的情况下使肝细胞更加容易粘附于微载体上。结果 磁力搅拌粘附培养的肝细胞粘附率高且稳定为90.3％±7.73，变异系数为8.56％；手工震荡粘附培养粘附率为69.5％±18.33，变异系数为26.37％，波动较大，两者差别有显著性P＜0.005。2周内磁力搅拌粘附培养的肝细胞白蛋白合成功能高于手工震荡粘附培养的肝细胞，差别有显著性P＜0.05。结论 该方法重复性强，稳定性好，操作方便，减少了肝细胞受污染的机会，同时肝细胞白蛋白合成功能强大。 （2）目的 建立乳猪肝细胞与非实质细胞大量聚集培养技术。方法采用磁力悬浮培养技术和装置进行聚集培养。结果 一次培养的肝细胞数可达2～5×10¹⁰个，聚集体肝细胞结构完整，相互之间形成紧密连接，出现胆管等肝组织特异性结构，同时保持良好的生物活性。结论 该方法能够较好地满足构建杂合型人工肝时对生物材料的要求。 2.家犬急性肝衰竭模型的制备 目的 建立方便易行的大动物肝衰竭模型，为人工肝提供适合的评价系统。方法采用乙酚氨基酚和四氯化碳联合、分次及不同途径给药的办法诱导家犬FHF模型。结果犬的一般表现、生化检测、血浆氨基酸分析等均符合肝性脑病的表现，病理显示肝脏形成急性肝衰竭特征性的以小叶为中心的大块坏死病变。模型犬经历麻醉、清醒、嗜睡和昏迷等阶段，经抢救可延长生存时间或存活，为可逆性模型。模型死亡率为90％，平均死亡时间34．4 ’J’时。结论该方法为国内首次报道，它操作简便，成功率高，成本较低，死亡前可有充分时间进行生物人工肝的支持治疗，满足本课题对动物模型的要求。 3．透析型杂合人工肝构建及其对肝衰竭犬的支持作用 ＊)目的 构建透析型杂合人工肝装置并评价该系统的安全性和稳定性。方法用中空纤维管和透析器连接氧合器供氧，以血泵提供循环动力，以恒温装置维持循环温度，以透析管道为循环通路，透析器的侧路入端用输液器连接腹透液，出端以消毒的硅胶管连接到有刻度的大量筒中，以输液架支撑腹透液，以输液架高低调节腹透液的输出速度，控制流出量略大于流入量。将聚集培养的肝细胞接种到中空纤维管外腔，构建透析型杂合人工肝装置。将该系统应用于正常的犬进行体外实验。结果 正常犬在实验结束后各项生命体征稳定，血常规无明显变化，生化指标白蛋白明显升高（P＜0．05），其他各项指标无明显变化。结论该系统的血液相容性好，对于循环系统、呼吸系统、水、电解质平衡等要求来说是安全、可靠、稳定的，为下一步实验提供了依据。 （2）目的 评价透析型杂合人工肝装置对肝衰竭犬的支持作用。方法 用透析型杂合人工肝系统对急性肝衰竭模型犬进行支持治疗，并与单纯接受血液透析治疗的透析组，仅接受内科基础综合治疗的对照组相互比较。结果杂合组经治疗后3～4小时清醒，存活时间平均为 38士 2小时O电解质基本维持在正常范围，肌酚、ALT、AST、LDH、胆红素、血氨明显下降，血糖稳定，白蛋白水平在治疗过程中逐步上升：透析组治疗大约4～5小时后，肝性脑病有所改善但未能清醒，存活时间为 34．5土 4．5小时，治疗中可维持血糖水平，水、电解质紊乱 －3－可短暂改善，肝肾功能障碍无明显改善：对照组肝性脑病未能改善，生化指标持续恶化。结论 我们设计的透析型人工肝装置对肝衰竭犬的肝脏功能、肾脏功能等均有较好的支持作用。与血液灌流型人工肝相比较血液透析对于电解质紊乱的纠正、血糖的稳定以及血氨的下降作用比血液灌流好，而血液灌流型人工肝对于内毒素的吸附、芳香族氨基酸的吸附以及降低胆红素的作用比血液透析好。两者在肝衰竭发生时的作用各有侧重，如果能结合功能完好的生物反应器，则可以更好的发挥杂合型人工肝的功能。