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目的:观察Ghrelin在肝缺血再灌注损伤介导肝纤维化进程中的抗纤维化作用,并基于TGF-β/Smad和MAPK/ERK通路探讨Ghrelin作用的分子机制。方法:72只C57BL/6J雄性小鼠分为假手术组（Sham组,n=24）、模型组（H/R组,n=24）及Ghrelin干预组（G-H/R组,n=24）。小鼠肝缺血再灌注损伤模型的建立采用半肝阻断法,阻断70%入肝血流,缺血90min,再灌注6h、24h、15d及8w,同时给予Ghrelin干预（术前15min及开夹前15min经尾静脉注射Ghrelin溶液（25ug/kg））;其中15d、8w组于术前14天在小鼠背部埋泵,（Ghrelin,50ug/kg/d）,后按时间点分别处死动物。检测血浆ALT、XOD、SOD、MDA含量;RT-qPCR检测肝组织中Collagen I、Collagen III、Has2、TGF-β1、PDGF、Smad2、Smad3、ERK1、ERK2mRNA水平;Western blot检测肝组织TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达量;免疫荧光染色观察α-SMA蛋白表达量;HE染色观察肝组织形态学变化,Masson染色观察肝组织胶原沉积状况。结果:1.与Sham组相比,H/R6h、H/R24h、H/R15d及H/R8w各组血浆ALT水平随再灌注时间延长呈现出不同程度的升高,其中以H/R6h组升高最为明显（P<0.001）,经Ghrelin干预后,各组血浆ALT水平明显下降（P<0.05）,整体呈下降趋势。2.RT-qPCR结果显示,与Sham组相比,H/R6h、H/R24h、H/R15d及H/R8w肝组织Collagen I、Collagen III、Has2mRNA的表达量随再灌注时间的延长呈明显上升趋势,尤以H/R15d及8w组升高最为明显（P<0.001）;经Ghrelin干预后,各组肝组织Collagen I、Collagen III、Has2mRNA表达量均有所降低（P<0.05）。Masson染色结果显示,H/R24h组可见胶原纤维沉积,H/R15d及8w组胶原纤维沉积面积明显扩大,胶原纤维沉积在肝小叶附近,胶原沉积面积随再灌注时间增加而扩大。Ghrelin干预后Masson染色的病理结果均有所改善,胶原沉积量明显减少,其胶原成分的改变与Collagen I、Collagen IIImRNA变化趋势相一致。ELISA结果显示,与Sham组相比,H/R6h、H/R24h、H/R15d及H/R8w组血浆LN含量随再灌注时间的延长呈明显上升的趋势,以H/R8w组升高最明显（P<0.01）;经Ghrelin干预后,各组LN含量均有所降低（P<0.01）。3.免疫荧光染色结果显示,与Sham组相比,H/R6h、H/R24h、H/R15d及H/R8w肝组织α-SMA的蛋白表达量随再灌注时间增加而不断升高,尤以H/R15d及H/R8w组增加最为明显,经Ghrelin干预后,各组肝组织α-SMA蛋白表达水平的整体趋势下降。4.与Sham组相比,H/R6h、H/R24h、H/R15d及H/R8w组血浆SOD含量随再灌注时间延长均有不同程度的降低（P<0.05）,而相同时间点血浆MDA、XOD含量则有所升高（P<0.05）,经Ghrelin干预后,各组SOD含量升高,而相同时间点XOD、MDA含量则明显下降（P<0.05）。5.RT-qPCR结果显示,与Sham组相比,H/R6h、H/R24h、H/R15d及H/R8w组肝组织中TGF-β1、Smad2、Smad3mRNA的表达量随再灌注时间的延长均有不同程度的升高,以H/R15d及8w组升高最为明显（P<0.001）,经Ghrelin干预后,各组肝组织TGF-β1、Smad2、Smad3mRNA的表达量随再灌注时间均有所下降（P<0.05）。与Sham组相比,H/R6h、H/R24h、H/R15d及H/R8w组肝组织PDGF、ERK1、ERK2 mRNA的表达量随再灌注时间延长均有所增加,其中以H/R15d及8w组升高最为显著（P<0.001）,经Ghrelin干预后,各组肝组织PDGF、ERK1、ERK2 mRNA表达量的整体趋势明显降低（P<0.05）。再灌注8w后,Western blot结果显示:与Sham组相比,H/R8w组肝组织TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达量均有所增加（P<0.001）,经Ghrelin干预后,相应的G-H/R8w组肝组织TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达量显著降低（P<0.001）。与Sham组相比,H/R8w组肝组织p-ERK1/2的蛋白表达量增加（P<0.001）;经Ghrelin干预后,相应的G-H/R8w组肝组织p-ERK1/2的蛋白表达量明显降低（P<0.001）。6.HE染色结果显示,H/R6h组肝脏存在淤血现象,肝细胞发生气球样变、细胞核碎裂,H/R24h组出现核溶解、细胞坏死的现象,并伴有炎症细胞聚集,H/R15d及H/R8w组出现不同程度肝小叶间隔增宽、中央静脉退化、肝细胞的完整性破坏等,肝脏形态学变化随再灌注时间增加而改变。G-H/R各组HE染色的病理结果均有所改善。结论:1.Ghrelin在肝缺血再灌注损伤介导肝纤维化进程中,能有效减少胶原和非胶原成分,减轻ECM沉积,表现出良好的抗纤维化作用。2.Ghrelin抑制肝缺血再灌注损伤介导肝纤维化形成的作用,主要是通过减轻氧化应激损伤、抑制HSC活化,减少细胞因子释放等途径实现的。3.Ghrelin在肝缺血再灌注损伤介导肝纤维化进程中延缓肝纤维化的分子机制可能是通过抑制TGF-β/Smad通路和MAPK/ERK通路的相关蛋白,使这两条通路的活化受阻后,导致HSC的活化减少,ECM沉积减轻而实现的。