脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus, EMCV)可以感染多种哺乳动物、啮齿类动物、节肢动物和人并引发脑炎、心肌炎和心肌周围炎等症状；能引致母猪繁殖障碍和仔猪致死性心肌炎，致死率可达100%；而人多以亚临床形式存在。目前EMCV流行范围越来越广，在亚洲、非洲、美洲、欧洲和澳洲均有发现，且感染率逐年增加，不仅给养殖业造成严重的影响，同时也危害着人类健康。本研究以脑心肌炎病毒为对象，进行了以下实验研究：1.研发了EMCV双抗原夹心ELISA试剂盒并获得了国家发明专利授权：试剂盒以EMCV重组VP1、VP2和2C蛋白作为包被抗原，HRP标记的EMCV为酶标抗原，最适包被浓度为6μg/mL，最适酶标抗原浓度为1:400，最佳样品作用时间为45min，最佳显色时间为30min。与间接ELISA比较，符合率93.5%，特异性为95%，敏感性为92.9%，与FMD、HEV、PPV、BVDV等病毒抗血清无交叉反应，连续生产3批次，批间和批内CV%均小于6%。因此所研发的试剂盒重复性、特异性和稳定性较好，灵敏度较高，可以作为EMCV临床抗体检测和血清学调查有效的方法。2. EMCV血清病学调查：⑴从东北、华北、西北等7个地区采集健康人群血清，用双抗原夹心ELISA检测抗体，结果EMCV抗体平均阳性率为30.56%，东北地区最高，阳性率为43.23%，华中地区最低，阳性率为11.26%，各区域之间存在显著性差异；通过分析，抗体阳性率与性别之间不存在关联，与年龄存在可能的线性关系。⑵从上述7个地区专门采集20±5岁青年人群血清进行检测，结果显示抗体阳性率平均为46.00%，高于全年龄段样品平均值，可能与这个年龄段的非家庭性流动、群居性及饮食有直接关系。⑶从这7个地区采集猪血清进行检测，结果抗体平均阳性率为77.00%，明显高于人源EMCV抗体，各区域之间差异不显著。⑷从甘肃某猪场选取30头猪，从出生开始采集血清，之后15d、30d、60d、75d、90d、120d、150d时分别采集血清并检测，结果显示30日龄仔猪抗体阳性率最高为90%，60日龄下降到6.67%，之后抗体阳性率随着时间逐步升高，到150日龄抗体阳性率达到86.67%，经分析，0-60仔猪日龄存在母源抗体保护，60d之后失去母源抗体保护，可自然感染EMCV，群体抗体阳性率又逐步升高。3.首次分离到EMCV甘肃毒株，命名为GS01，对其全基因组进行测序，基因全长为7717bp，CDS区6879bp， Genbank登记号为：KJ524642，与国内其他分离毒株同源性99.4%-99.9%。病毒在BHK-21细胞培养3代后TCID50为10-5.8/0.1mL，病毒对小鼠具有极高致死性，LD50为10-3.75/0.5mL。4.针对EMCV VP1序列，设计合成了4对编码siRNA的序列并构建真核表达载体，脂质体介导转染至BHK-21细胞并接种EMCV，结果4组siRNA均能抑制脑心肌炎病毒增值，其中X109-2组抑制作用最显著，下降了103.5倍；各组均不能抑制FMDV、JEV等病毒，表明RNAi技术可以抑制EMCV病毒在BHK-21细胞中增殖，特异性好；X109-2组质粒转染至CHO-K1细胞中，还可以抑制pEGF-C1-EMCV-VP1的表达，表明RNAi具有明确靶向性。综上，本研究建立了双抗原夹心ELISA检测方法，积累了EMCV流行病学数据，首次分离到了EMCV甘肃毒株，探索了RNAi技术抑制病毒复制的效果，为进一步研究EMCV致病机制和防治等奠定基础。