一个肝癌相关基因的克隆和功能的初步分析

来源 :中国科学院研究生院(上海生命科学研究院) | 被引量 : 0次 | 上传用户:LHL1111111111
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肝癌是我国以及东南亚地区常见的恶性肿瘤之一,在我国每年至少有11万人死于肝癌,占世界年肝癌死亡总数的40%1,2肝癌的病理学研究结果表明,肝癌的发生发展是一个多步骤多基因参予的过程2;我们实验室从研究肝癌基因的表达谱入手,先后用RDA3(代表性差异分析)和cDNA array4(微阵列)的方法,发现了一系列肝癌“相关”基因,其中大部分是已知基因,对这些基因的研究,已经为肝癌的发生发展提供了一些线索5,6;少数是一些未知基因,这些基因相关信息少,甚至是一无所知,增加了对结果分析的困难,因此有必要搞清它们的功能,同时作为新基因本身,也值得研究。为此,我选择了一个基因,作为硕士研究的课题来确定它的功能。该基因我们自己命名为SVH;它属于一个大的蛋白同源家族,目前还未见报导。其成员有Alex-1,2,3, BM-017及一些未名蛋白。这些蛋白的功能都不确定,与SVH有很好的局部同源性(接近50%);因此确定SVH的功能对于揭示这个家族的功能有重要意义。结合NCBI的网上数据库分析和对比,利用RT-PCR的方法,我们克隆到了这个基因。SVH有一个完整的蛋白阅读框。以其编码区全长做探针的Northern Blot结果显示SVH有三种转录本,最小的有2K;该基因在肾脏、肝、胃、皮层、脊髓中都有表达(20周龄人胚);我们首次发现 SVH有五种亚型,并克隆到了其中的四种;发现这四种亚型不仅有组织表达的差异而且可以共存于一种细胞中。用自制的抗体做的免疫印染实验表明,SVH初步定位在内质网中;我们还做了每一种亚型的绿荧光蛋白融合表达的亚细胞定位,结果与前者吻合,每一种亚型都呈现基本相同的定位。
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