研究背景流感是一种由流感病毒感染引起的以呼吸道炎症为主要症状的呼吸系统疾病,具有高度传染性,严重可导致死亡。由于流感病毒的不断进化,流感病毒表面糖蛋白持续发生抗原漂移和抗原转换,此外出现新毒株和抗病毒药物的耐药毒株,给流感的治疗和防控带来了更大的困难,流感仍然是一项持续存在的公共卫生挑战。为了有效的预防和治疗流感,深入研究流感病毒与宿主的相互作用以及流感病毒的的致病机制显得至关重要。流感病毒感染引起炎性因子释放增加可导致细胞因子风暴,引起过度炎症反应,使机体受损,严重时可致患者死亡。过度炎症反应是流感病毒的重要致病机制之一,而细胞自噬是参与调控病毒感染引起炎症反应的重要机制之一,随着对自噬机制的深入研究,越来越多的研究发现流感病毒与宿主的自噬防御系统存在复杂的相互作用关系。一方面,甲型流感病毒感染可诱导自噬,直接利用自噬机制促进病毒自身的复制、成熟和释放,增强病毒感染;另一方面,宿主细胞可通过调节自噬过程,将细胞受损底物和病毒颗粒运输到溶酶体降解,阻断病毒复制和传播,防止流感病毒进一步感染。此外,肌浆网/内质网钙离子ATP酶（SERCA）的主要功能是控制细胞质钙平衡,研究表明SERCA在自噬的诱导、自噬膜、自噬体和自噬溶酶体的形成中发挥重要作用,抑制SERCA活性可阻断自噬体和溶酶体的融合。因此,研究宿主细胞SERCA在流感病毒感染所致自噬过程紊乱和过度炎症反应中的作用及机制具有重要意义。研究目的探究肌浆网/内质网钙离子ATP酶（SERCA）在甲型流感病毒感染人肺癌细胞阻断自噬流和诱发的细胞过度炎症反应中的作用,深入研究流感病毒的致病机制,为流感毒的预防和治疗的作用靶点提供新的思路和方法。研究方法1.通过金刚烷胺AMD（甲型流感病毒M2离子通道阻断剂）处理流感病毒PPH2（AMD敏感）和PR8（AMD耐药）感染的人肺癌细胞H1395,Western Blot实验检测流感病毒M2离子通道蛋白对流感病毒感染细胞的自噬体堆积影响,检测AMD对PPH2和PR8感染细胞SERCA活性的影响。2.通过CDN1163（SERCA激活剂）预处理PR8感染细胞,Western Blot、免疫荧光和q PCR实验检测CDN1163对PR8感染引起的自噬体堆积及自噬流变化的影响,检测炎症因子的变化差异及引起炎症因子差异的信号通路。3.使用RNAi技术减少H1395细胞中SERCA蛋白的表达,Western Blot、免疫荧光和q PCR实验检测SERCA表达沉默的细胞在PR8感染后自噬及自噬流的变化,检测炎症因子的变化差异和MAPK-JNK信号通路的磷酸化。研究结果1.AMD可降低PPH2感染细胞LC3-II蛋白表达量,减少PPH2感染细胞造成的SERCA活性下降,但对PR8感染细胞无影响。2.CDN1163预处理可显著减少流感病毒PR8感染细胞中的SQSTM1和LC3-Ⅱ蛋白表达,并部分恢复细胞自噬流,降低PR8感染细胞炎症因子（IFN-α、IFN-β、IL-8和CCL5）水平和MAPK-JNK通路磷酸化蛋白p-JNK/JNK和p-p38/p38的比值。3.使用RNAi技术可以有效沉默SERCA蛋白表达,使PR8感染细胞中SQSTM1和LC3-Ⅱ蛋白表达增加,自噬流受阻加重,细胞炎症因子（IFN-α、IFN-β、IL-8和CCL5）进一步显著升高,p-JNK/JNK和p-p38/p38比值显著升高。研究结论1.流感病毒感染引起自噬体堆积和炎症因子增多。2.SERCA参与流感病毒诱导的自噬过程,可减轻流感病毒造成的自噬体堆积和自噬流受阻。3.SERCA参与流感病毒诱导炎症反应过程,可调节流感病毒诱导的炎症因子水平升高。4.SERCA可能通过MAPK-JNK信号通路调节流感病毒感染引起的炎症反应。