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蛋白酶是最重要的工业酶制剂之一,但商业化的蛋白酶制剂种类相对较少,难以满足目前工业发展的需求。使得优质产酶菌株的筛选和选育有着十分重要的应用价值。本研究通过构建产蛋白酶细菌库以及研究该菌种库的基本特征,可有助于进一步开发利用这些微生物资源。主要研究结果如下:(1)从全国17个地点共采集了 110种水果、蔬菜以及土样等样品,经样品的预处理和稀释涂布,从中分离得到1544株菌株。分子生物学鉴定的结果表明,细菌有1171株,分属于62个属,212个种。(2)进一步从上述微生物菌种库中筛选得到458株产蛋白酶菌株,它们分属于31个属,87个种。其中,Buttiauxella、Desulfovibrio、Rodentibacter、Glutamicibacter与Hafnia来源的蛋白酶目前尚未报道。从葡萄干、香蕉、小白菜以及肉摊周围的土样等样品中筛选到的产蛋白酶菌株分别为12、13、25和15株,分别占从该样品分离的微生物总数的63.16%、54.17%、58.14%以及56.66%。该产蛋白酶细菌库中芽胞杆菌属(Bacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、短小杆菌属(Curtobacterium)以及沙雷氏菌属(Serratia)的菌株数量分别占该库菌株总数的62%、6.67%、5.78%以及6.44%,其他属的菌株占比皆在3%以下。(3)对产蛋白酶细菌库中42株具有较高蛋白酶活性的菌株进行发酵培养和酶学特性研究。结果表明,这42株细菌所产蛋白酶皆为中性或者碱性蛋白酶;同一微生物因培养时间不同可产生不同种类蛋白酶;不同菌株所产蛋白酶的最适温度差异较大;而且同一种属的微生物有很大的个体差异。(4)在摇瓶水平上,B7649及B8102蛋白酶的酶活分别为41.24U/mL和41.76U/mL。进一步通过硫酸铵沉淀、脱盐和凝胶过滤层析对它们进行纯化后,B7649和B8102的纯化倍数和得率分别为16.38倍和23.54%,21.56倍和18.47%。其中,B7649和B8102蛋白酶的最适作用温度和pH分别为60℃和9.0,以及60℃和10.0。它们分别在50℃和40℃条件下具有良好的热稳定性。在pH 7.0～11.0这一较宽的范围内,这两种蛋白酶均具有较好的稳定性,孵育2h后酶活均保持在90%以上。Co2+、Cu2+、Fe3+对B7649及B8102蛋白酶均有不同程度的抑制作用。Zn2+对B8102蛋白酶有抑制作用,而对B7649蛋白酶的活性没有影响。Ca2+对两种蛋白酶具有明显的激活作用。