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嗜酒极大危害身体和社会,对患者认知功能的也会产生极大损伤,长时间饮酒、大量饮酒,会严重影响患者工作、生活、学习、总体健康状况等各项社会功能。酒精中毒是一种慢性、复发性疾病。负面情绪状态和不良情绪的事件更容易导致酒精滥用。由于长期饮酒,多数合并躯体损害,以心、肝、神经系统最为明显,长期饮酒可以导致中枢和周围神经系统损害,出现酒精中毒症状。H2S作为一种神经递质,生理剂量的H2S可以舒张血管,增加微循环,直接拮抗氧化应激造成的损伤,诱导海马CAl区长时程增强,加强兴奋性突触后电位,提高学习记忆能力。H2S浓度很高时,会损害活体器官的中枢神经系统,特异性地抑制突触后膜电位的兴奋,神经传递功能受阻,具有可逆性,同时可通过钙超载破坏线粒体的结构功能,能量代谢受阻,细胞坏死。慢性酒精中毒可以促进体内H2S的生成,通过激活胱硫醚-β-合酶。我国慢性酒精中毒的患病率近年来呈逐年增高趋势,已经成为值得关注的社会公共卫生问题之一,急需开发具有治疗功能的药物。本实验的主要目的就是探究丁苯酞对慢性酒精中毒大鼠的海马H2S/CBS系统、学习记忆、记忆相关蛋白以及生物学的影响。第一部分:丁苯酞对慢性酒精中毒大鼠海马内H2S和F-actin的影响目的:探究丁苯酞(butylphthalide,NBP)对慢性酒精中毒大鼠学习记忆能力、胱硫醚β合成酶(CBS)活性、海马内硫化氢(H2S)和纤维状肌动蛋白(F-actin)含量的影响。方法:将100只SD雄性大鼠随机平均分为5组,除对照组外,各组饮含6%(v/v)酒精水溶液28d,酒精溶液每日9:00配制,置换。14d后,NBP低、中、高剂量组大鼠灌胃不同剂量NBP(大约14天),于饮酒结束后采用Y型电迷宫测试酒精中毒大鼠的学习记忆能力,随后检测海马组织H2S的含量、CBS活性及海马纤维状肌动蛋白(F-actin)含量。结果:与空白对照组大鼠学会所需训练的次数(38.3750±3.9306)、CBS活性(55.4640±3.5170)、海马H2S含量(13.9589±2.1119)和F-actin在阳性细胞中的表达相比,模型组大鼠学会所需训练的次数(83.0625±4.6686)、CBS活性(76.7890±4.2084)和H2S含量(25.6796±2.4960)均升高,F-actin的阳性表达降低,有极显著性差异(P<0.01)。与模型组大鼠相比,丁苯酞低、中、高剂量组大鼠学会所需训练的次数(77.8750±4.3340)(65.1875±4.2461)(62.1250±4.9514)、CBS活性(70.9180±3.0542)(64.7020±2.4332)(62.4570±2.0700)和海马内H2S含量(20.8504±1.5303)(17.4829±1.4241)(16.2821±0.8353)均降低,F-actin的阳性表达升高,且具有统计学意义(P<0.01)。结论:NBP能够减轻慢性酒精中毒大鼠症状,改善酒精对大鼠学习记忆能力的影响,可能与NBP影响CBS活性、H2S和F-actin的含量有关。第二部分:丁苯酞对慢性酒精中毒大鼠海马硫化氢及髓鞘碱性蛋白的影响目的:这项研究探讨丁苯酞(NBP)对慢性酒精中毒大鼠学习记忆能力的积极影响。本实验对各组大鼠的学习记忆能力,海马组织内硫化氢(H2S)含量,胱硫醚-β-合成酶(CBS)的活性,碱性髓鞘蛋白(MBP)含量和电镜下线粒体与脱髓鞘(Demyelination)的情况进行了讨论。方法:将60只SD雄性大鼠随机平均分为5组,除对照组外,各组饮含6%(v/v)酒精水溶液28d,酒精溶液每日9:00配制,置换。14d后,NBP治疗组大鼠灌胃中剂量NBP(大约14天),于饮酒结束后采用Y型电迷宫测试酒精中毒大鼠的学习记忆能力,随后检测海马组织H2S的含量、CBS活性、海马MBP的表达情况及电镜下线粒体与脱髓鞘(Demyelination)的情况。结果:结果表明,与正常组相比,模型组大鼠的学习记忆能力和MBP的含量明显下降;H2S含量和CBS活性明显升高(P<0.01);线粒体数量减少,重度肿胀;髓鞘疏松,脱落。与模型组相比,NBP用药组大鼠的学习记忆能力和MBP的含量明显升高;海马内H2S含量和CBS活性明显降低(P<0.05);线粒体数量增加,肿胀减轻;髓鞘疏松,脱落的程度减轻。结论:NBP可以减轻慢性酒精中毒对大鼠学习记忆能力的损伤,这可能与NBP影响H2S/CBS系统的表达和对线粒体和MBP的保护作用有关。第三部分:丁苯酞对大鼠慢性酒精中毒后差异性表达基因的生物信息学分析目的:分析SD大鼠慢性酒精中毒(chronic alcoholism)后及给予丁苯酞治疗2周后的大鼠大脑海马的差异表达基因,探讨其生物学意义。方法:利用Illumina测序芯片对大鼠海马进行基因测序得出原始数据,参照Audic S等人发表在Genome Research上的数字化基因表达谱差异基因检测方法(Audic,Claverie.1997)对数据做预处理和差异性表达基因(differentialy expressiond genes,DEGs)的筛选,对其进行Gene Ontology功能显著性富集分析及Pathway显著富集分析。同时借助STRING在线数据库,进行DEGs的蛋白质—蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析。结果:模型组与正常组相比共有208个DEGs,其中51个基因表达上调,157个基因表达下调。Pathway富集分析显示与神经退行性疾病有关的氧化磷酸化通路、Huntington、Parkinson及Alzheimer通路是比较显著的差异性表达基因通路。用药组与模型组相比共有585个DEGs,其中320个基因表达上调,265个基因表达下调。Pathway富集分析显示氧化磷酸化通路、粘着连接通路、蛋白酶体通路、脂肪细胞因子通路和MAPK信号通路等等富集程度较高。用药组与正常组相比共有352个DEGs,其中124个表达上调,228个表达下调。Pathway富集分析显示Wnt信号通路,蛋白质的消化和吸收通路,其他聚糖降解通路,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解通路,粘着连接通路等等富集程度较高。结论:NBP可能通过上调/下调酒精中毒下调/上调的Gls2、Tars2、Slc25a18、Ckmt1、Cox6c、Ndufb8、Ndufa4、Ndufa2、Ndufb6及LOC679739等基因,保护线粒体及髓鞘,改善大鼠的学习记忆能力。