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金属硫蛋白(Metallothionein，MT)是由61个左右的氨基酸组成的低分子量的蛋白质(约6500Da)。每个MT分子可以结合7个金属离子。在正常生理条件下，MT主要与锌或者锌、铜相结合(Zn-MT／Zn,Cu-MT)。它在锌转运和储存中起重要作用。本课题以小鼠为试验动物，分三部分试验来研究机体锌营养状况对MT的影响。 1、依据血清碱性磷酸酶(AKP)活性确定锌耗竭天数。将10只21日龄体重13～14g的雄性昆明小白鼠分别单独饲养于塑料代谢鼠笼中，喂以纯合饲粮(含锌2.13mg／kg)。在试验初始，及试验的第5d、10d、15d眶下静脉取血，制备血清，检测其AKP活性，以确定使小鼠体内AKP水平处于正常范围内的天数。试验结果显示缺锌10d时，小鼠体内AKP水平处于正常范围内，而随缺锌时间的续继延长，小鼠体内AKP活性则会有所升高。 2、在锌耗竭的基础上将30只21日龄体重13～14g单独饲养于塑料代谢鼠笼中的雄性昆明小白鼠随机划分为三个处理组：第一组为对照组，第二组为限饲组，第三组为低锌组。三个处理组的饲粮锌浓度和饲喂制度如下：①对照组，饲粮锌浓度为30mg／kg；任其自由采食。②限饲组，饲粮锌浓度为30mg／kg；依据锌耗竭期内的平均日采食量进行等量饲喂。⑧低锌组，饲粮锌浓度为2.13mg／kg，任其自由采食。此试验结果为： ①限饲应激初期(10d)导致血浆MT总量上升，脏器内MT总量下降。而随应激时间延长(20d)血浆MT总量有所下降，且低于对照组，脏器内MT总量则升高，肝脏、肾脏、小肠MT总量分别上升63.63％、20.85％、10.59％。 ②低锌组在整个试验期内脏器MT总量均低于对照组。但试验后期与试验初期相比低锌纽除小肠MT总量下降了30.82％外，血浆、肝脏、肾脏MT总量均有所升高。血浆MT总量升高65.28％、肝脏MT总量升高38.27％、肾脏MT总量升高34.17％。 ③小肠MT总量在短期试验(10d)时就能对锌缺乏做出反应，但不能很好的区分限饲应激和锌缺乏，而随试验期延长(20d)血浆MT总量可单独用于锌缺乏的评定，长期锌缺乏导致血浆MT总量显著升高(P＜0.05)，限饲应激使血浆MT总量略有下降(P＞0.05)；肝脏、小肠MT总量虽各处理间差异不显著，但它们对限饲应激和低锌饲粮做出的反应不同，可用锌缺乏的估计，锌缺乏使肝脏、小肠MT总量下降，而限饲应激使MT总量变化正好相反。 ④MT与Zn、Cu结合的比例存在组织间差异。正常情况下血浆MT中Zn与Cu的比例是1:3，肝脏、小肠的比例是3:1，而肾脏的比例接近1:1。而在限饲应激、锌缺乏 硕士学位论文 金属硫蛋白对机体锌营养状况的标示作用 东北农业大学 一 情况下血浆、肝脏、肾脏、小肠MT结合Zn的比例升高。限饲组肝脏MT中Zn与Cu 的比例约为6：1、肾脏的比例接近2：1、血浆和小肠则全部与h结合。低锌饲粮组血浆、 肝脏、肾脏、小肠MT都以Zn．MT形式存在。 ⑤肾脏Zn．MT含量可作为评定锌缺乏的单独指标，而血浆、肝脏、小肠Zn．MT含 量不可以作为评定锌缺乏的单独指标。但在评定锌缺乏时，Zn－MT含量可以提高MT总 量评定的准确性。1回 3、在锌耗竭的基础上通过饲喂含锌量分别为 10mg／kg、30mg／kg、50mg／kg、70mg／kg、 90mthe、110mg／kg、130mg／kg、150mg／kg的纯合饲粮（通过添加 ZnSO。·YI。O实现，实 际饲粮锌浓度为 15．18mg／kg、30．75mg／kg、36．91mg／kg、45刀3mg／kg、58．67mg／kg、 76．79mg／kg、101．75mg／kg、137石Zing／kg），测出MT总量及Zn－MT含量与饲粮锌水平的 相关性。试验结果为： MT总量与饲粮锌水平存在如下相关性： 回归方程 RZ P 血浆 Y—0、0064x’＋09774x＋100．7252 00346 06436 肝脏 Y—0刀079x2．0．83fix＋116川95 0二546 0刀457 肾脏 Y二00098x’＋13652x。1023705 03045 00154 小肠 Y—0刀川2x2＋二刀192x。325805 02857 0刀409 注：a：Y为＊T总量，血浆单位为卜＊。1加1、脏器单位为卜m。1岭：x为饲粮锌水平，单位为＊g／kg。 b：R’为相关系数，尸为概率。 Zn－MT总量与饲粮锌水平存在如下相关性： 回归方程 R’P 血浆 Y一．00088x’＋15660x＋645434 0刀580 0．4738 肝脏Y—00128x2－19512x＋136．5905 0二756 0刀339 肾脏 Y—0．0136x‘－2．4389x＋门74049 0．1774 0．1059 小肠 Y一．0刀102x2＋2刀192x＋32．5805 0．2857 0刀409 注：a：Y为Zn－＊T总量，血浆单位为卜mol／ml、脏器单位为pmol／kg；x为饲粮锌水平，单位为 mg／xg。 b：R’为相关系数，P为概率。