铁氰化物(MHCF)属于无机聚合物,其空间结构类似沸石,具有独特的稳定性、电催化性能及良好的电子传递能力,因而引起广大电化学工作者的高度重视,并将其广泛应用于生物传感器的研究中;而纳米金(GNPs)具有优良的电学、磁学、光学性质以及优越的生物相容性,在生化免疫分析、电化学、生物医药以及临床诊断等领域越来越显示其重要的作用,本文旨在采用电化学沉积法在ITO表面制备GNPs膜和MHCF膜,以获得电化学响应好、抗体负载量大、稳定性强的无试剂电化学免疫传感器。主要工作分为两个部分:第一部分,利用电沉积技术将GNPs和电子媒介体普鲁士蓝(PB)膜依次修饰到ITO电极上,GNPs膜不但可以促进PB膜的电子传递能力,且可以提高PB膜的可逆性及稳定性;为了进一步改善PB膜的性能,选用一种带正电荷的两亲性聚合物微乳液(PDS)覆盖到PB膜上,既防止了PB膜的渗漏,又促进了电子的传递,最后利用吸附性能强、生物相容性好的金溶胶将羊抗鼠抗体(Anti-MIgG)吸附固定在修饰电极表面,从而制得基于PDS/PB/GNPs膜的无试剂电化学免疫传感器。用铁氰化钾探针分子对PDS膜的性能进行考察,采用循环伏安法考察电极修饰过程中GNPs对PB膜性能的影响、PDS膜对PB膜性能的影响以及免疫反应条件的优化(孵育时间、孵育温度等)。并将该传感器成功应用于健康人空白血浆中鼠抗原回收率的测定,最后对该传感器的再生性能进行了一定的研究。实验结果表明,GNPs膜作为沉积PB膜的基底,不但可以促进PB膜的电子传递,且提高了PB膜的可逆性及稳定性;在PDS膜的作用下,PB膜的稳定性及峰电流均有较大增加;在pH=6.0的PBS中有良好的电化学响应,在最佳实验条件:pH=6.0的PBS、孵育时间为30min、孵育温度为37℃,该免疫传感器对鼠抗原(MIgG)有灵敏的响应及良好的线性关系,其响应范围是5~200ng/mL,可再生使用4次。第二部分,采用电沉积的方法将粒径均匀、性能稳定的GNPs和电子媒介体铁氰化钴(CoHCF)膜依次修饰到ITO电极上,GNPs能够改善CoHCF膜的性能,使得CoHCF膜更加均匀稳定,最后用明胶(Gel)将抗体修饰到电极表面,得到基于Gel+Anti-MIgG/CoHCF/GNPs膜无试剂电化学免疫传感器,采用循环伏安法考察固定在电极表面的Anti-MIgG与MIgG之间的免疫反应以及条件(孵育时间、孵育温度等)。实验表明,GNPs膜作为沉积CoHCF膜的基底,对CoHCF膜的性能有很大改善,如电子传递能力、稳定性、均匀有序性等;在pH=7.0的PBS中,基于CoHCF/GNPs膜的修饰电极有较大的电流响应;在最佳实验条件:pH=7.0的PBS、孵育时间为30min、孵育温度为37℃,该免疫传感器对MIgG有灵敏的响应及良好的线性关系,其响应范围是10~200 ng/mL,检测限达到ng/mL级。该传感器具有良好的选择性及再生功能,且制备方法简单、灵敏度高,能进行快速、在线检测。