百合渣中总皂苷的提取纯化与免疫活性研究

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百合富含多种营养成分与活性物质,被国家卫生部列入首批药食兼用资源目录,其鳞茎具有润肺止咳、调理脾胃、增强免疫等功效。生产百合淀粉过程中产生的百合渣往往是废弃,造成了极大的资源浪费。本文通过对百合渣的活性成分预试后,以总皂苷为研究对象,对其提取、纯化工艺进行了优化。并初步探讨了初步纯化物对小鼠免疫功能的影响。主要研究内容如下:1)以总皂苷得率为指标,对超声-微波协同萃取百合渣中总皂苷的工艺进行了研究。通过单因素实验研究了乙醇浓度、液料比、微波功率、提取时间等因素对总皂苷得率的影响。在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken实验原理,以总皂苷得率为响应值,设计了四因素三水平的响应面实验。对实验结果进行回归分析后优选出最佳提取工艺为:乙醇浓度77%,液料比11mL/g,微波功率503W,提取时间139s。在此最佳条件下,总皂苷得率为6.36‰,提取率达87.4%。2)采用大孔吸附树脂对总皂苷进行纯化。对S-8、AB-8及X-5三种大孔吸附树脂的物理性质、静态吸附量与解吸率、静态吸附动力学曲线进行了比较。筛选出静态吸附量最大,达到静态吸附平衡较快,洗脱率较高的AB-8大孔吸附树脂纯化百合总皂苷粗提液。并通过静态吸附时pH与盐离子浓度、动态吸附时的上样液浓度与流速、洗脱时的洗脱剂体积分数与流速等因素研究了AB-8型大孔吸附树脂纯化百合总皂苷粗提液的工艺条件。得出了AB-8型大孔吸附树脂柱纯化总皂苷的最佳工艺。上柱条件为:上样液浓度2.0mg/mL,pH=7.0,盐离子浓度2.0mg/mL,流速3BV/h。洗脱条件为:洗脱液为70%乙醇,流速2BV/h。纯化后百合总皂苷的纯度由35.2%提高到64.3%。3)从免疫器官胸腺指数与脾脏指数、淋巴细胞增殖、抗体细胞生成及半溶血值等四个方面探讨了百合总皂苷初步纯化物对小鼠免疫功能的影响。实验结果显示中、高剂量组与对照组脾指数相比差异均显著;中剂量组与对照组胸腺指数相比差异显著。淋巴细胞增殖实验,中、高剂量组与对照组相比差异均显著。抗体生成细胞实验,中、高剂量组与对照组相比差异均显著。表明百合总皂苷初步纯化物对小鼠的细胞免疫及体液免疫存在一定的促进作用。
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