中药槐角及其转化产物对人乳腺癌细胞增殖凋亡的影响

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中草药预防和治疗乳腺癌越来越受到重视,其中异黄酮类防治乳腺癌的作用倍受关注。槐角因富含槐角苷、染料木苷、染料木素等异黄酮植物雌激素,具有抗肿瘤活性。本论文主要研究槐角及其生物转化产物对人乳腺癌细胞的增殖凋亡的影响,为乳腺癌的防治提供依据。研究方法:分别以槐角及其转化产物处理对数生长期的人乳腺癌MCF-7(ER+)、MDA-MB-231(ER-)细胞株,应用MTT法检测药品对细胞的增殖影响;通过形态学观察、DNA ladder、免疫印迹、PI单染等不同方法研究药品对MCF-7细胞的增殖影响及初步机制。首先研究了槐角及其转化物对人乳腺癌细胞的增殖影响。结果发现,槐角及其转化2天产物不影响MCF-7细胞的增殖,转化16天产物作用72 h后显著抑制其增殖;槐角及其转化物促进MDA-MB-231细胞增殖且随着作用时间的延长促增殖作用增强。其次分别研究了槐角及其转化物的多糖、异黄酮粗提物对人乳腺癌细胞的增殖影响。结果发现,槐角转化2天、16天粗提物异黄酮作用MCF-7细胞显著抑制其增殖,未转化的槐角中的异黄酮影响不显著;槐角转化前后提取的异黄酮粗提物均促进MDA-MB-231细胞的增殖。槐角转化前后提取的粗多糖不影响MCF-7细胞的增殖;而显著促进MDA-MB-231(ER-)细胞的增殖。最后研究了槐角转化2天提取产物染料木素、16天提取产物异樱黄素对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响。结果发现,染料木素和异樱黄素显著抑制MCF-7细胞增殖,而不影响MDA-MB-231细胞的增殖;异樱黄素引起典型的MCF-7凋亡细胞形态学变化;未发现染料木素、异樱黄素作用细胞的DNA断裂的梯状条带;Western blotting结果显示染料木素、异樱黄素作用MCF-7细胞24、48、72 h均活化caspase-3并切割其底物PARP,长时间作用于MDA-MB-231细胞活化caspase-3但不切割底物PARP;PI单染流式检测显示,异樱黄素作用MCF-7细胞72 h促凋亡,凋亡率为12.1%。对其细胞周期的影响主要表现为:染料木素显著阻滞细胞于S期;异樱黄素阻滞细胞于G1-S期。槐角转化产物染料木素、异樱黄素作为有效成分对乳腺癌细胞有一定的抗增殖、促凋亡作用,在分子机理初步探讨中发现主要是影响了caspase-3的表达。
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