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牙齿的发育作为一个上皮-间充质、上皮-上皮交互诱导发挥重要作用的复杂的多阶段过程，在其发育过程中每个组织结构都会参与其中，各种组织细胞以及各组织细胞之间大量信号分子的产生和信号的传导都是牙齿正常发育所必需的。中间层细胞虽数量不多，但其位置特殊，它紧靠不同分化状态的内釉上皮并伴随整个内釉上皮的分化过程和成釉细胞的分泌过程，由开始时的2-3层细胞结构演变为单细胞结构，并随成釉细胞分泌的结束逐渐消失。中间层的建立及其在牙胚发育中与内釉上皮／成釉细胞间多种信号分子的交互作用，对釉质的正常发育是必不可少的，中间层在牙胚发育特别是牙胚形态发生中发挥关键作用。研究目的：本实验拟建立鼠牙胚中间层发育的实验模型，采用HE染色、免疫组化等技术，明确中间层细胞在釉质形成过程中的形态学变化，并探讨中间层细胞在釉质分泌与矿化过程中的生物学功能，为进一步研究其在成釉细胞分化和釉质形成中的具体作用机制提供理论依据。研究方法：1、建立出生后BALB／C小鼠牙胚中间层发育HE染色的实验模型；电镜观察其超微结构的变化。2、采用原位末端标记法(TUNEL法)及SP免疫组织化学技术，观察中间层及成釉细胞在分化各阶段细胞凋亡与增殖的表达情况；3、SP免疫组化技术检测ALP、OC、BSP、OPN、DMP1、E-cad、FMN、BGN、DCN等矿化相关蛋白在成釉阶段于中间层和成釉细胞中的时空表达。研究结果：1、钟状晚期细胞处于分化期，中间层为2-3层的多细胞层结构，电镜下可见少量的粗面内质网、线粒体等细胞器成分，内釉上皮呈柱状或高柱状，可见中间层与成釉细胞间的桥粒连接；釉质分泌期，中间层呈明显的单细胞结构，细胞排列紧密，与周围组织的界限清楚，成釉细胞呈高柱状，可见大量釉质的分泌，线粒体、粗面内质网、高尔基复合体等细胞器成分明显增多，细胞间的桥粒连接明显；随着釉质的不断建立，釉质分泌基本完成，中间层结构已不易辨认，此时牙齿亦部分萌出，电镜下细胞间联系疏松，细胞器成分萎缩变减少。2、早期中间层细胞PCNA强阳性表达，成釉细胞亦成阳性，牙冠发育的后期PCNA在两者中的表达逐渐减弱并消失；凋亡在分化各期的成釉细胞及晚期的中间层细胞中皆有表达，尤其在成熟期成釉细胞中的表达明显强于釉质形成早期。3、在釉质形成的阶段，ALP、OC、BSP、OPN、DMP1、E-cad和FM在中间层和成釉细胞中有阳性表达，ALP、E-cad在中间层的阳性表达先于成釉细胞，随分泌过程阳性表达由中间层转移到成釉细胞；BSP、OPN、DMP1和FM在中间层和成釉细胞阳性表达仅见于成釉细胞分泌的后期，分泌早期未见阳性表达。研究结论：1、在釉质分泌及矿化过程中中间层细胞器成分及与成釉细胞间的连接逐渐增多，提示中间层在釉质形成中起到了一定的物质转运及营养支持功能。2、细胞增殖与凋亡是牙齿正常发育所必需的重要调控机制，中间层细胞与成釉细胞间的增殖与凋亡在时空表达强弱程度变化上具有一致性，具有一定“量”的变化相关性，提示中间层对成釉细胞的分化及釉质形态的正常发育起到一定的调控作用。3、矿化信号分子在中间层与成釉细胞上皮间的表达具有时空特异性，这些信号分子对成釉细胞的分泌具有重要的调控作用，中间层在其中可能发挥一定的诱导作用。