胍盐离子液体修饰的磁性纳米材料纯化生物样品中的DNA

来源 :湖南师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:haungmg666
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基于DNA的分析是众多生物应用的基础,然而,从环境基质中或者生物样品中分离出高纯度的DNA是复杂且富有挑战性的。传统的DNA提取技术是采用酚-氯仿液液萃取,但该方法需要使用大量的有机溶剂,对人体健康有害。源自固相萃取技术的磁性固相萃取技术现已在DNA纯化中得到应用,磁性固相萃取集分离富集为一体,省去离心步骤,具有操作简便,回收重复利用率高,能实现自动化等优点。本研究基于磁性固相萃取技术,制备了11种由不同胍盐离子液体修饰的磁性壳聚糖-氧化石墨烯(Guanidinium ionic liquid modified-magnetic chitosan/graphene oxide,GIL-MCGO)复合纳米材料,将其作为磁性吸附剂结合磁固相萃取技术,对DNA进行了纯化分离。这些GIL-MCGO的直径约为20纳米,通过一块普通的磁铁,GIL-MCGO即可对单链DNA及鲑鱼精子DNA钠盐进行快速纯化富集。本研究采用NanoDrop 2000分光光度计对所制备的11种GIL-MCGO的DNA提取率进行了评估。通过单因素实验系统的研究了可能影响DNA提取的相关因素,如pH值、温度、提取时间和离子强度。结果表明,在pH=4的BR缓冲液中,使用10 mg GIL-MCGO在35℃的条件下提取1 mL DNA钠盐(2500 ngμL-1)样品溶液时,GIL-MCGO对DNA的单位提取量最大为233.0±0.4 mg g-1。此外,通过对使用后的GIL-MCGO进行回收可重复利用的实验,观察到GIL-MCGO经过四次提取-解吸后对DNA的提取效率仍达到96.9±2.33%,表明GIL-MCGO在DNA的提取分离中可重复利用性良好。此外,对GIL-MCGO和DNA之间的相互作用进行了初步研究:测试了GIL-MCGO在具有不同碱基组成的DNA吸收方面的偏好。随后,进一步将该方法应用于多种复杂样品中DNA的提取,包括金属混合物,蛋白质混合物,人全血和大肠杆菌细胞裂解液,发现提取后的DNA的纯度较高,可用于PCR扩增。
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