生物碱是人类研究最多的一类天然有机化合物,多数具有显著的生理活性。如何快速高效地分离和筛选出具有生物活性的生物碱类化合物是当前药物研究的一大挑战。本文利用逆流色谱研究了莲子心生物碱和细胞松弛素类生物碱的分离条件,建立了几种有效分离这两类生物碱的新方法,对于深入开发这些生物碱药物具有重要意义。 论文首先建立了一种应用线性溶剂梯度作为分离条件的逆流色谱法分离莲子心(Nelumbo nucifera)中的莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱,利用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-5mmol氨水(pH7.5)(4:6:3:7,v/v)和(5:5:5:6,v/v)梯度洗脱,克服了传统逆流色谱大多使用有毒溶剂(氯仿)、分离时间过长等缺点。在此基础上发展了一种连续洗脱推出逆流色谱法,采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-8mmol氨水(5:5:5:6,v/v)体系三次连续洗脱,高效制备莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱,节约时间和溶剂10％和35％。 论文还应用五种人肿瘤细胞模型,考察以上三种生物碱的体外肿瘤细胞增殖抑制作用,结果显示异莲心碱对肿瘤细胞的抑制作用最好,IC50均小于40μg/ml。甲基莲心碱对Bcap37、SPC-A、HeLa、SGC-7901的抑制作用较好,IC50小于40μg/ml。莲心碱对人肿瘤细胞的抑制效果较弱,对Bcap37、SPC-A、SGC-7901的半数增殖抑制浓度IC50为40-60μg/m。 其次,本论文将活性筛选与逆流色谱分离结合在一起,建立了“逆流色谱分离-细胞活性检测”筛选细胞松弛素的研究体系,采用正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(6:3:2:5,v/v)体系将粗提取分段,经过体外抗肿瘤细胞活性检测,确定竹生肉球菌(Engleromyces geetzii P.Henn.)氯仿提取物中的主要成分为松胞菌素D。在此基础上为了有效分离松胞菌素D及其类似物,建立了一种梯度洗脱逆流色谱法,采用正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(5:5:4:6,v/v)和(5:5:6:4,v/v)体系成功地分离出四种细胞松弛素类化合物：松胞菌素D,englomycin,zygosporin D,19,20-epoxycytochalasin D,纯度分别为99.1％、90.5％、93.5％、92.2％。其中zygosporinD在竹生肉球菌中首次被分离。