斜带石斑鱼抗菌肽-2的基因克隆、活性及其组织内表达

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近年来,在养殖业暴发的大规模的感染性疾病导致了海水鱼类的大量死亡,而抗菌肽被证明是鱼类非特异性免疫的一种主要机制而可能用于对抗感染性疾病。抗菌肽(antimicrobialpeptides)是具有抗菌活性的肽类的总称。目前发现抗菌肽或类似抗菌肽的小分子肽类广泛存在于昆虫、水产动物、两栖类、鸟类、哺乳动物、植物和微生物中。由cDNA编码的抗菌肽-2是从斜带石斑鱼(orange-spottedgrouper,Epinepheluscoioides)cDNA文库中分离出来。这个抗菌肽由52个氨基酸残基组成,其中包括了信号肽(22个氨基酸残基)和成熟肽(30个氨基酸残基)。   本实验结果分为以下三部分:首先,运用PCR技术扩增抗菌肽-2(epinecidin-2)的全基因,并与其cDNA序列相比较,从而得到具有3个内含子和4个外显子的基因结构。同时运用反向PCR技术扩增得到其上游调控序列,序列包括了TATA区,CAAT区等调控序列;接着,运用化学固相合成的方法合成高纯度的成熟抗菌肽-2,并用稀释法对16种革兰氏阴性和阳性菌进行了抑菌实验,这些细菌大部分都是水生病原菌,其中抗菌肽-2对温和气单胞菌、少动假单胞菌、施氏假单胞菌以及摩根尔摩根菌表现了较强的抑菌效果(最低杀死浓度(MBC)<8μM),对其他的菌种也有一定的抑菌效果;最后,运用半定量RT-PCR和原位杂交方法,检测抗菌肽-2在斜带石斑鱼各组织(包括心,脾,脑,肾,肝,皮肤,鳃和肠等)的表达分布,并初步研究注射免疫调节剂与抗菌肽表达量的时间依赖关系和浓度依赖关系。结果发现抗菌肽广泛存在于各组织中,尤其是在头肾、脾和肠中分布较多。   从实验结果概括来说,斜带石斑鱼抗菌肽-2是一种潜在的可用于治疗和防御细菌感染的新型药物,而且它可以作为转基因鱼的候选基因去提高水产养殖的抗病能力。
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