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采用二甲基联苯胺(DAB)染色的组织化学和CeCl<,3>染色的细胞化学方法,研究水分胁迫和外源ABA处理可诱导玉米(Zea mays L.)细胞在质外体产生H<,2>O<,2>的机理。实验结果显示,利用NADPt{氧化酶、过氧化物酶(POD)及多胺氧化酶(PAO)的抑制剂预处理都可以降低水分胁迫和外源ABA诱导的质外体H<,2>O<,2>的产生,表明这三种酶是诱导质外体产生H<,2>O<,2>的来源。相比较而言,用NADPH氧化酶抑制剂预处理后,抑制H<,2>O<,2>产生的效果最为明显,而POD及PAO的抑制剂预处理后效果则较弱,表明NADPH氧化酶是水分胁迫和外源ABA诱导下质外体H<,2>O<,2>产生的主要来源。进一步研究了水分胁迫和外源ABA处理下质膜NADPH氧化酶、细胞壁POD和质外体PAO的活性,发现处理后它们的活性均有增加。以上结果表明,水分胁迫和外源ABA通过诱导质膜NADPH氧化酶、细胞壁POD及质外体PAO活性的升高,进而在质外体产生H<,2>O<,2>,其中质膜NADPH氧化酶可能起主要作用。
用PEG6000模拟水分胁迫的研究结果表明,水分胁迫能够诱导玉米叶片内源ABA的积累。通过运用ABA合成抑制剂钨酸盐(Tu)预处理以及组织化学和电镜观察结果表明,ABA参与了水分胁迫诱导玉米叶片H<,2>O<,2>的产生;而酶活性分析显示,内源ABA的积累也能够诱导质膜NADPH氧化酶、细胞壁POD和质外体PAO的活性。这些数据暗示,水分胁迫诱导玉米细胞质外体H<,2>O<,2>的产生可能是由于水分胁迫下内源ABA的积累通过激活质膜NADPH氧化酶、细胞壁POD以及质外体PAO的活性而实现的。