仙客来离体培养及体细胞无性系变异的研究

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本实验以仙客来‘浓香’(Cyclamen persicum Mill.)为试材,在MS基本培养基中分别添加不同浓度2,4-D和NAA两种生长素类植物生长调节剂诱导愈伤组织,进而研究了仙客来体细胞无性系建立过程中,由2,4-D或NAA诱导而来的愈伤组织的芽分化、根分化和继代培养问题。本实验初步研究了活性炭(AC),维生素(Vc),和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)对仙客来外植体抗褐化的作用效果。为了解仙客来体细胞无性系变异的情况,应用秋水仙素为诱变剂对愈伤组织进行诱变,对自然变异株和诱变株进行了形态学及同功酶谱检测。 结果表明:仙客来再生体系建立最佳外植体为幼株叶片。2,4-D和NAA均可诱导愈伤组织;最佳诱导愈伤组织培养基为MS附加2,4-D 0.5mg/L和BA 0.2mg/L。分化培养基为MS附加BA2.0mg/L、2,4-D0.5mg/L和KT 0.2mg/L;生根培养基为1/2MS,附加IBA0.5mg/L和BA0.05mg/L。继代培养中,对于愈伤组织增殖,2,4-D诱导得到的愈伤组织的继代培养基为原诱导培养基;NAA诱导得到的愈伤组织应转入含有NAA1mg/L的继代培养基中;芽分化阶段的继代培养应转入含有BA1mg/L的培养基中。 仙客来适宜的抗褐化剂和使用浓度为Vc使用200mg/L浓度,PVP使用0.04%浓度。 秋水仙素处理时间与浓度对愈伤组织死亡率和不定芽分化率均有影响,但处理时间对仙客来愈伤组织死亡率的影响明显大于处理浓度的效应,在处理后35天观察时处理浓度与处理时间对仙客来的愈伤组织的死亡率存在互作效应。根据秋水仙素处理后愈伤组织死亡率和不定芽分化率衡量,诱变的最佳浓度和时间为100mg/L处理15天。 仙客来体细胞无性系在自然培养条件下变异率很高,变异类型丰富;由2,4-D和NAA诱导得到的再生植株变异率没有明显差别;经过秋水仙素处理后,无论是由2,4-D诱导得到的还是由NAA诱导得到的再生植株变异率对比未经秋水仙素处理得到的植株,变异率提高。
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