一种不依赖限制性核酸内切酶和DNA连接酶的盐芥cDAN文库的构建及其在耐盐资源基因挖掘中的应用

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盐芥(Thellungiella halophila)是一种与模式生物拟南芥(Arabidopsis thaliana)亲缘关系很近的十字花科且能在高盐的环境下生存的盐生植物。为从这种生物中挖掘耐盐基因,我们用盐胁迫对其处理后构建了盐芥cDNA文库。文库的构建完全不依赖于限制性核酸内切酶和DNA连接酶,而使用一种改进了的cDNA合成和依靠重组的cDNA文库的构建方法。这种cDNA文库的构建程序大大简化,而且质量得到提高。同样通过重组克隆,Entry cDNA文库穿梭到双元载体pCB406,得到盐芥cDNA表达文库,用于转化和表达,创制大量转基因株系,挖掘功能基因。
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