GDNF在大鼠神经系统发育分化中的基因表达分布与变化及GDNF基因克隆与表达

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GDNF是刚被发现的一种新型神经营养因子,由于对中枢多巴胺能神经元、脑脊运动神经元这两类易受损而产生退行性变神经元具有极强的特异性促营养活性而倍受研究工作者们的重视,通过基因敲除技术已发现它对交感、副交感,躯体感觉神经元以及运动神经元的发育起重要作用,然而,对于其在神经系统内的详细发育分布状况却至今知之不多。本实验利用原位杂交技术结合RT-PCR技术观察了GDNF从E16~成年大鼠神经系统内的分布;为了更进一步研究GDNF在神经发育中的作用与作用机制,本实验还利用基因克隆技术克隆了人GDNF基因并进行了原核表达GDNF蛋白的研究。 本实验结果如下: (1).GDNF在神经系统内的分布:主要集中在纹状体、僵核、脑脊髓运动神经核团、脊髓前后角、三叉神经节、背根神经节内,散在于海马结构内。在纹状体、僵核内,于E16~P7期间表达较强,三叉神经节、背根神经节内,在P0~P10期间出现一过性表达,在脑、脊髓运动神经元核团内,GDNF表达在所研究的时间范围内出现两次峰值,即E16~P0、P7~P14。以述区域内,在P21以后,表达迅速下降,至成年,几乎很少出现阳性信号。这些结果提示:GDNF可能在大鼠出生前后,对上述区域内效应神经元的生长、发育起调控作用。 (2).本研究利用RT-PCR技术克隆了编码人GDNF基因,通过测序表明所克隆到的序列与发表序列一致,在原核细胞中表达出了GDNF蛋白,测活表明具有促中脑神经元营养活性,为我们进一步研究GDNF打下了基础。
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