NOTCH2NLA基因在卵巢癌发病中的作用及相关机制的体内研究

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目的:本研究利用公共数据库通过生物信息学分析识别卵巢癌中潜在的新型的肿瘤发生和预后的基因,并筛选出危险比最高的基因NOTCH2NLA基因,通过动物模型对NOTCH2NLA基因在卵巢癌发病及预后中的作用进行验证。方法:采用基因型-组织表达数据库、癌症基因组图谱数据库及国际癌症基因组协会获得m RNA测序数据集和临床信息,藉由R语言筛选和识别出可能影响卵巢癌发生和进展的关键基因。对可能影响卵巢癌的基因进行综合生存分析,然后进行内部验证。A2780-GFP细胞分为两组,一组通过将A2780细胞通过NOTCH2NLA的si RNA细胞转染得到NOTCH2NLA沉默细胞,另一组细胞经过阴性对照的si RNA转染得到阴性对照细胞。将NU/NU雌性裸鼠(12只)分成两组,皮下植入含有NOTCH2NLA沉默细胞的无血清培养液为NOTCH2NLA沉默组和皮下植入含有阴性对照细胞的无血清培养液为对照组。观察裸鼠异种移植瘤的形成情况,切除肿瘤组织,并固定、切片,采用HE染色法观察移植瘤的组织学特点,免疫组织化学法测定Ki67、E-cadherin、Vimentin、SNAI2在移植瘤中的分布和表达。在NOTCH2NLA沉默组中,分析NOTCH2NLA与各检测指标的相关性。结果:1.生物信息学分析的结果基于生物信息学分析方法对基因型-组织表达数据库、癌症基因组图谱数据库及国际癌症基因组协会的公共数据进行分析,建立了卵巢癌患者生存预测的八基因模型,包括PI3、CCDC80、IL27RA、HERC1、NOTCH2NLA、HMGB3、CXCL11、CXCL9,其中PI3、CCDC80、IL27RA、HERC1、NOTCH2NLA为不良预后,HMGB3、CXCL11、CXCL9为保护性预后。并从中筛选出危险比最高的基因NOTCH2NLA基因。2.动物模型获取异种移植瘤的结果结果显示异种移植瘤均呈椭球形或不规则形,质实,糟脆;对照组与NOTCH2NLA沉默组相比体积较大,且差异有统计学意义。3.HE的结果对照组与NOTCH2NLA沉默组的异种移植瘤组织都可见大量的肿瘤细胞及癌巢,内可见神经、血管及肌肉浸润,但对照组的坏死面积比NOTCH2NLA沉默组大。4.免疫组织化学法的结果免疫组织化学方法检测发现在NOTCH2NLA沉默组中E-cadherin的表达升高,Vimentin、Ki67和SNAI2在NOTCH2NLA沉默组中的表达低于对照组。免疫组织化学图像结果通过IPP图像分析软件进行半定量分析,对照组平均光密度值:Ki67(0.004949033±0.001742568),Vimentin(0.017516897±0.0089690405),E-cadheri(0.000351671±0.0000825260),SNAI2(0.002890062±0.0007460115),NOTCH2NLA沉默组平均光密度值:Ki67(0.000327524±0.0003223711),Vimentin(0.003964411±0.003981856),E-cadheri(0.008766560±0.001112801),SNAI2(0.000009753±0.000003315)。进行组间比较示:对照组与NOTCH2NLA沉默组之间有统计学差异(P<0.05)。结论:1.NOTCH2NLA基因属于不良预后基因;2.NOTCH2NLA基因在裸鼠体内可促进肿瘤的生长;3.在卵巢癌组织中沉默NOTCH2NLA后E-cadherin的表达上调,Vimentin、Ki67和SNAI2表达下调。
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