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宽筋藤为防己科青牛胆属植物中华青牛胆Tinpspora sinensis(Lour.)Merr.的藤茎,主要分布于广东、海南、广西、云南、青海等地,为传统的民族药,在藏族、傣族、阿昌族、崩龙族、景颇族、佤族、苗族、哈尼族、毛南族、仫佬族、瑶族、壮族均有使用,具有舒筋活络、祛风止痛的功效,用于风湿痹痛等病症治疗。通过查阅文献,我们对宽筋藤的化学成分研究情况进行了概况,发现宽筋藤的已知的化学成分现有百余种,主要包含萜类、黄酮类、生物碱类、苯丙素类、酚苷类等成分。现代药理研究证实,宽筋藤具有抗炎镇痛、抗利什曼、抗氧化、抗辐射、保肝、调节免疫、阻止环磷酰胺引起的贫血等药理作用。本论文主要对宽筋藤的化学成分和药理作用进行研究,以期丰富宽筋藤的化学成分,探究其药理作用,同时也为治疗类风湿性关节炎的新药研发提供理论依据。本论文分为两部分。第一部分:宽筋藤化学成分的研究本实验采用正向硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、MCI柱色谱以及高效液相色谱等多种分离纯化方法与UV、MS、NMR、CD等多种鉴定方法,对宽筋藤95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行研究,共鉴定出了25个化合物。其中包含6个黄酮类化合物,4个苯丙素类化合物,3个萜类化合物,7个酰胺类化合物,5个芳苷类化合物。其中,6个黄酮类化合物分别为:quercetin、rutin、isorhamnetin、Narcissoside、Nicotiflorin、Tamarixetin 3-O-rutinoside。4个苯丙素类化合物分别为:syringaresinol-O-β-D-glucopyranoside、4,4’-dimethoxy-3’-hydroxy-7,9’:7,9’-diepoxylignan-3-O-β-D-glucopyranoside、7a-[(β-D-glucopyranosyl)oxy]isolariciresinol、Tinosinen。3个萜类化合物分别为:Tinosineside B、Tinocordiside、tinosinenside A。7个酰胺类化合物分别为:cyclo-(Val-Tyr)、cyclo-(Ile-Ala)、tyrosine、5-(1-methylpropyl)-3,6-dioxo-2-piperazineacetic acid、N-acetyl-1-ethyl ester glutamic acid、cyclo-(Ala-Pro)、proline。5个酚苷类化合物分别为:benzyl-O-β-D-glucopyranoside、(2-hydroxyphenyl)methylβ-D-Glucopyranoside、Tachioside、3-ethoxy-4-methoxyphenol-β-D-glucopyranoside、Salidroside。其中,化合物tinosinenside A,3-ethoxy-4-methoxyphenol-β-D-glucopyranoside为新化合物,化合物Narcissoside、Nicotiflorin、Tamarixetin 3-O-rutinoside、cyclo-(Val-Tyr)、cyclo-(Ile-Ala)、tyrosine、5-(1-methylpropyl)-3,6-dioxo-2-piperazineacetic acid、N-acetyl-1-ethyl ester glutamic acid、cyclo-(Ala-Pro)、proline、benzyl-O-β-D-glucopyranoside、(2-hydroxyphenyl)methylβ-D-Glucopyranoside、Tachioside、Salidroside为首次从该植物中分离得到的化合物,化合物N-acetyl-1-ethyl ester glutamic acid为首次分离到的天然产物。第二部分:宽筋藤药理作用的研究建立胶原诱导的大鼠类风湿性关节炎(CIA)模型,研究宽筋藤治疗类风湿性关节炎的药理作用。首先,通过大鼠关节指数、足肿胀程度、机械痛阈值评价宽筋藤对关节炎症的治疗效果。其中,关节炎指数是指肉眼观测大鼠后足关节红肿情况,对其进行关节炎指数评分,以其得分情况判断大鼠的足部红肿情况;足肿胀程度是指使用足跖肿胀测定仪对大鼠的踝关节以下(包含踝关节)进行容积测定,以其后足肿胀率判断大鼠的足肿胀情况;机械痛阈值是指使用von-Frey纤维刺激大鼠足跖,当其出现缩足反应的数值即为其痛阈值。结果显示,宽筋藤能有效减轻类风湿性关节炎的症状,其中包括关节红肿的减轻以及疼痛的缓解。其次,通过Micro-PET成像观测宽筋藤对类风湿性关节炎炎症的影响。对大鼠注射短寿命的放射性18F-脱氧葡萄糖(18F-FDG),通过其在关节处的代谢聚集,并通过SUV值观测宽筋藤对大鼠的类风湿性关节炎治疗情况。实验结果显示,对比模型对照组,给予宽筋藤的大鼠关节处的SUV值明显降低,即宽筋藤对类风湿性关节炎的炎症有一定的治疗效果。之后,通过HE染色观测宽筋藤治疗类风湿性关节炎在组织病理学的影响。我们对大鼠的后肢踝关节进行染色,观察其是否有滑膜细胞增生、炎性细胞浸润以及软骨和骨组织的破坏。实验结果显示,宽筋藤可缓解CIA大鼠关节的滑膜细胞增生与炎性细胞浸润。最后,通过ELISA、Western blot对宽筋藤治疗类风湿性关节炎的分子水平进行研究。ELISA检测血清中三个细胞炎性因子TNF-α,IL-1β,IL-17的含量。文献报道中,三个炎性因子和类风湿性关节炎中都有着密不可分的联系。Western blot检测MAPK信号通路中的关键蛋白ERK,p38的磷酸化水平。实验结果显示,宽筋藤对类风湿性关节炎起到治疗作用可能通过抑制促炎因子TNF-α,IL-1β,IL-17的释放,以及有效抑制关节组织中ERK,p38的磷酸化水平的表达等多个途径实现的。