研究背景：　　恶性淋巴瘤是一组起源于淋巴结或淋巴结以外淋巴组织的高度异质性的恶性肿瘤，死亡率在全部肿瘤疾病中排第10位。近年来随着对恶性淋巴瘤的分子生物学机制、细胞遗传学特点研究的逐渐加深，一些新型免疫治疗和分子靶向治疗使某些亚型的恶性淋巴瘤患者获得良好的治疗效果及更佳的预后。尽管如此，仍有一些恶性淋巴瘤因其恶性程度高且进展快，在治疗中、治疗后易转移和复发。因此，探讨淋巴瘤的侵袭及转移机制具有重要意义。P-选择素糖蛋白配体1（P-selectinglycoprotein ligand1,PSGL-1，CD162）是白细胞表面的一种具有同源二聚体结构的跨膜唾液酸黏蛋白，是P选择素（P-selectin）的主要配体，具有介导细胞黏附、淋巴细胞归巢、调节白细胞在血管内皮细胞表面滚动等作用。在炎症环境下，PSGL-1促进白细胞与血管内皮细胞的紧密连接并促使白细胞穿越血管壁到炎症部位。在许多实体瘤中，PSGL-1对于肿瘤转移也具有重要意义。研究发现，肿瘤细胞来源的PSGL-1，通过与血管内皮、血小板和白细胞表面的选择素结合促进肿瘤细胞转移。已有学者证实，表达PSGL-1的人前列腺癌细胞及小细胞肺癌细胞，其转移侵袭能力明显强于未表达者。2007年Geert Raes等通过基因动物模型研究表明，PSGL-1同样表达在鼠源性T和B淋巴细胞瘤细胞系上，并参与淋巴瘤细胞的血行转移。但目前尚无有关PSGL-1与人体恶性淋巴瘤的的相关报道。因此，本文拟通过检测PSGL-1在淋巴瘤中的表达情况，及细胞实验了解PSGL-1与恶性淋巴瘤细胞生物学行为的相关性，分析其与恶性淋巴瘤疾病发生发展及血行转移的关系，并探讨其可能的作用机制，为临床上恶性淋巴瘤的疾病诊治、预后判断提供一定理论依据。　　目的：　　1.了解PSGL-1在恶性淋巴瘤中的表达情况。　　2.探讨PSGL-1与恶性淋巴瘤患者临床资料的相关性。　　3.探讨PSGL-1蛋白对恶性淋巴瘤细胞迁移、增殖与凋亡的影响。　　方法：　　第一部分：免疫组化方法检测淋巴结反应性增生组织、恶性淋巴瘤组织 PSGL-1的表达　　收集淋巴结反应性增生组织和恶性淋巴瘤组织标本，用免疫组化方法（采用非生物素二步法检测）分别检测30例恶性淋巴瘤组织及10例淋巴结反应性增生组织PSGL-1的表达。严格按照免疫组化SP试剂盒说明书完成实验过程。完成统计分析，了解PSGL-1蛋白在恶性淋巴瘤的表达情况及其与淋巴瘤分型、分化及预后的关系。　　第二部分：构建靶向PSGL-1基因的siRNA脂质体并转染至Raji淋巴瘤细胞系，采用Western Blot法检测Raji细胞中PSGL-1的沉默效果。　　购买Raji淋巴瘤细胞系并进行细胞培养。收集对数期生长的细胞并将其分成2组，构建靶向PSGL-1基因的siRNA脂质体并转染Raji细胞。低温超速离心提取细胞蛋白。BCA法测定蛋白浓度，严格按照Western blot试剂盒说明书完成实验过程。对比转染前后PSGL-1在淋巴瘤中的表达情况，并为细胞迁移实验、细胞增殖及凋亡实验做准备。　　第三部分：采用Transwell方法对比沉默PSGL-1基因前后的Raji细胞迁移能力。　　根据Raji细胞的直径，选择孔径为0.8μm的Transwell小室。将研究的细胞种在上室内，并加入无双抗无胎牛血清的培养基，下层培养液为无双抗有胎牛血清的培养基，37℃、5％CO2环境下培养48小时，对下室内细胞进行细胞计数，对比实验组和对照组的实验结果，了解PSGL-1蛋白对于细胞迁移能力的影响。　　第四部分：采用CCK8、流式细胞术检测对比沉默PSGL-1基因前后Raji细胞的增殖与凋亡情况。　　按照CCK8试剂使用说明，向对照组和实验组的细胞中各加入10μl CCK8，并将细胞放置于37℃、5%CO2环境中培养24h、48h、72h，并检测450mM吸光度值。对比不同时间点两组间细胞增殖的结果。同时根据Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒操作说明，对空白对照组、阴性对照组、实验组的细胞进行细胞凋亡检测。了解PSGL-1蛋白对于细胞增殖及凋亡能力的影响。　　结果：　　第一部分：PSGL-1在淋巴结反应性增生、惰性淋巴瘤、侵袭性淋巴瘤组织中的表达　　1.PSGL-1在恶性淋巴瘤中高表达而在淋巴结反应性增生组织中低表达，差异有统计学意义(P<0.05)。结果提示PSGL-1的高表达有可能预示恶性肿瘤的发生。　　2.PSGL-1在侵袭性淋巴瘤中高表达而在惰性淋巴瘤中低表达，差异有统计学意义(P<0.05)。结果提示PSGL-1的高表达有可能与恶性肿瘤的恶性程度相关。　　3.我们通过对比分析不同细胞来源的恶性淋巴瘤的表达情况，发现PSGL-1在T细胞来源的淋巴瘤中表达略高于在B细胞来源的淋巴瘤中的表达，差异无统计学意义。这可能与我们标本量太少影响统计结果有关。　　第二部分：PSGL-1在人淋巴瘤组织中的表达情况与临床资料分析　　1.PSGL-1的表达程度与Ki67表达呈正相关（R=0.539，P=0.037）。提示其表达可能与淋巴瘤的恶性增殖程度相关，即淋巴瘤细胞增殖程度越强，PSGL-1蛋白表达可能越高。　　2.临床统计分析提示，PSGL-1的表达与淋巴瘤的结外器官转移有关，差异有统计学意义(P=0.026)。提示发生结外器官转移的恶性淋巴瘤患者其PSGL-1表达相对较高。　　第三部分：对比沉默PSGL-1基因前后的Raji细胞迁移能力　　转染48h后利用细胞计数板对 Transwell下室内细胞计数，结果发现：实验组细胞计数明显少于对照组细胞计数，差异有统计学意义(P<0.01)。说明沉默PSGL-1后，Raji细胞的迁移能力明显降低。该结果证明，PSGL-1的表达有助于Raji淋巴瘤细胞的迁移运动，同时间接证明PSGL-1的表达有助于淋巴瘤细胞的结外器官转移。　　第四部分：对比沉默PSGL-1基因前后Raji细胞的增殖与凋亡情况。　　1.经过转染后，siRNA组与NC组细胞增殖情况无明显差异，差异无统计学意义（P＞0.05）。提示PSGL-1的表达可能不参与淋巴瘤细胞的增殖过程。　　2.利用流式细胞术检测转染前后空白对照组、阴性对照组及实验组的细胞凋亡情况，实验结果显示，阴性对照组与实验组细胞凋亡情况无差异。提示PSGL-1的表达可能不参与淋巴瘤细胞的凋亡过程。　　结论：　　1.PSGL-1在恶性淋巴瘤中的高表达提示其可能参与恶性淋巴瘤的发生，并与恶性淋巴瘤恶性程度相关。　　2.PSGL-1表达越明显可能提示恶性淋巴瘤增殖、结外转移程度越高，提示PSGL-1的表达可能参与淋巴瘤的血型转移过程。　　3.PSGL-1的表达可能不参与细胞的增殖和凋亡。