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目的观察原花青素B2(Procyanidin B2,PC B2)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)炎症介质表达的影响,初步探讨原花青素B2对人牙周膜细胞的抗炎作用。材料与方法采用改良组织块法体外培养原代hPDLCs,倒置显微镜下进行形态学观察,免疫细胞化学染色SP法进行细胞鉴定;采用MTT法检测PC B2对hPDLCs活性的影响;采用qRT-PCR和ELISA技术检测PC B2对P.gingivalis LPS作用hPDLCs后IL-1β、IL-6、IL-8基因和蛋白表达的影响;hPDLCs装载DCFH-DA荧光探针,荧光显微镜下观察PC B2对P.gingivalis LPS作用hPDLCs后细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生的影响;Griess法检测PC B2对P.gingivalis LPS作用hPDLCs后分泌总一氧化氮(nitric oxide,NO)的影响。采用graphpad prism 6软件对实验数据进行统计学分析。结果1、成功培养hPDLCs,镜下细胞呈长梭形或多角形,胞突细长,胞浆丰富,细胞核大呈卵圆形,培养细胞呈放射状或旋涡状排列;免疫细胞化学染色SP法显示,培养细胞抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性。2、6.25-200μg/mL浓度PC B2作用于hPDLCs 1天,对细胞活性无影响(P>0.05);第2、3天,100μg/mL PC B2可增强hPDLCs增殖活性(P<0.05)。3、与阴性对照组比较,P.gingivalis LPS显著上调hPDLCs IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA表达(P<0.001);PC B2从50μg/mL浓度组开始下调IL-1β、IL-8 mRNA的表达(P<0.05),从25μg/mL浓度组即可下调IL-6 mRNA表达(P<0.05)。4、与阴性对照组比较,P.gingivalis LPS显著上调hPDLCs IL-1β、IL-6、IL-8蛋白表达(P<0.01);在24h时间点,PC B2从50μg/mL浓度组开始下调hPDLCs三种蛋白表达量(P<0.05);在48h时间点,对于IL-1β蛋白,PC B2从50μg/mL浓度组降低其表达(P<0.05),对于IL-6蛋白,25μg/mL组即能明显抑制其分泌(P<0.01),对于IL-8蛋白,100μg/mL组能显著下调其表达(P<0.01)。5、与阴性对照组比较,P.gingivalis LPS能上调hPDLCs胞浆内ROS表达;经100μg/mL PC B2预处理1小时可下调其表达。6、与阴性对照组比较,P.gingivalis LPS可促进hPDLCs NO分泌(P<0.001);经100μg/mL PC B2预处理1小时可降低NO表达(P<0.01)。结论PC B2可通过下调P.gingivalis LPS诱导hPDLCs细胞因子表达以及抑制活性氧和一氧化氮产生,可能发挥一定的抗炎作用。