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背景与目的:老年性黄斑变性（Age-related macular degeneration,AMD）是西方国家老年人不可逆的视力损伤、甚至致盲的重要眼底疾病[1]。近年来,随着我国经济的发展、人民生活水平的不断提高,以及人口老龄化的加剧,AMD已逐渐成为导致我国老年人群严重视力损伤的首要原因,直接影响老年人的身心健康和生活质量。根据眼底萎缩性改变或脉络膜新生血管（choroidal neovascularization,CNV）形成等不同的临床特征,AMD目前主要分为干性AMD和湿性AMD两大类。晚期干性AMD患者广泛的视网膜色素上皮和光感受器损伤以及湿性AMD患者新生血管引起的渗出、出血及瘢痕都会造成患者严重的视力损害。因此,深入研究AMD发生和发展机制,探索新的预防和治疗途径,已成为当前我国及世界眼科发展所面临的重大问题以及研究热点。目前AMD的发病机制尚未明确,一般认为遗传因素和环境因素的综合作用启动了该病的发生,衰老和氧化应激引起了早期病变,炎症引导视网膜由生理性老化向不可逆的病理性损伤转变,这些因素互相协同、影响,交叉作用,共同参与AMD的病理过程。近年来多项研究提示视网膜慢性光损伤在AMD的发生发展中起着重要的作用。数项针对类似生活方式的人群的AMD流行病学调查显示,AMD的发病率和日光中短波光照的累积时间呈正相关。在无晶体眼或人工晶体眼的人群中,由于非生理眼丧失了对紫外线和蓝光的过滤作用,AMD的发病率明显增高;而在晶体混浊或具有蓝光滤过的人工晶体的人群中,黄斑变性的发病率显著下降。在AMD发生发展中,免疫系统的过度激活和慢性炎症也起重要作用。小胶质细胞（microglia）为视网膜的内源性免疫细胞,通常分布于内层视网膜,发挥监视、清除视网膜代谢产物的功能。越来越多研究发现,在AMD长期、慢性的病理机制中,microglia的活化与视网膜损伤关系密切,但是microglia的活化对视网膜起保护作用还是加剧视网膜损伤尚未明确。本课题拟研究慢性低能量蓝光照射下小鼠视网膜形态、功能变化,CCR2基因敲除介导的小胶质趋化异常对慢性低能量蓝光视网膜光损伤的保护作用,以及小胶质细胞通过NLRP3加剧视网膜光损伤的机制。方法:第一部分,我们利用自制的视网膜蓝光光照设备,采用低能量500 lux蓝光照射（blue light exposure,BLE）C57BL/6小鼠,昼照夜息,分别照射1月和3月,与对照组C57BL/6小鼠（Wild type,WT）比较:1.视网膜功能损伤:暗适应后不同光刺激下的视网膜视网膜电图（electroretinogram,ERG）;2.视网膜形态变化:石蜡切片HE染色分析视网膜厚度;3.视网膜内小胶质细胞活化状态:冰冻切片IBA-1免疫荧光染色。第二部分,利用小胶质细胞趋化因子CCR2基因敲除鼠,分析:1.冰冻切片IBA-1免疫荧光染色定量CCR2基因敲除后,WT和BLE小鼠中视网膜内小胶质细胞的活化量;2.ERG分析CCR2基因敲除对BLE后视网膜损伤的功能保护作用;3.石蜡切片HE染色和TUNEL染色分析CCR2基因敲除对视网膜形态损伤的保护作用。第三部分,对比WT Ctrl,WT+BLE,CCR2-/-+BLE三组:1.冰冻切片分析视网膜内IBA-1、NLRP3、IL-1β的分布;2.Western blot分析视网膜和RPE-脉络膜复合体中NLRP3相关炎性分子的蛋白表达量。结果:第一部分,WT小鼠经慢性BLE 3月后,小鼠ERG上a、b波振幅明显降低;石蜡切片HE染色示外核层厚度明显变薄;视网膜内小胶质细胞活化量在全层、内、外层视网膜内皆增多。第二部分,CCR2基因敲除鼠中,BLE后视网膜内小胶质细胞活化量较WT鼠中明显减少;ERG提示CCR2基因敲除可以缓解视网膜光损伤;CCR2基因敲除后HE染色发现BLE导致视网膜外层厚度变薄程度减少、TUNEL染色后凋亡细胞减少。第三部分,BLE后,WT小鼠视网膜内NLRP3、pro-Caspase-1,Caspase-1,及IL-1β表达增多;CCR2基因敲除后,BLE后视网膜内NLRP3、pro-Caspase-1,Caspase-1,及IL-1β表达减少。另外,小胶质细胞及其胞内的NLRP3激活在视网膜功能、形态的损伤出现前已发生。结论:为期3月的慢性、低能量蓝光照射后可以诱导视网膜损伤,这种慢性视网膜光损伤与小胶质细胞的活化相关,CCR2基因敲除介导的小胶质细胞趋化受损能够缓解视网膜光损伤,进一步机制研究提示小胶质细胞可能通过NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路加剧视网膜慢性蓝光损伤。针对小胶质细胞趋化因子CCR2、NLRP3为靶点的治疗可能为未来防治视网膜慢性炎性损伤提供新方向。