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本文以200-300目硅胶颗粒为载体，戊二醛为交联剂，进行了胰蛋白酶固定化。以光度比色法测定蛋白酶活力为指标，优化了戊二醛浓度、固定化时间、温度、pH值和酶用量等固定化参数，研究了固定化酶的基本特性、最适作用温度和pH、酸碱和储存稳定性及固定化酶的重复使用。结果表明:经优化，戊二醛最适浓度为1％，固定化最适时间为2.5h，最适温度为4℃，固定化pH为8.0，酶与载体比例为50mg/g。固定化胰蛋白酶比活力为4.89×105 U/g，粒径大小为60.08±10.34(μm)，粒子数为1.43×107/g，密度(ρ)为0.395g/cm3，含水量为26.98％。最适作用温度和pH范围分别为60℃和6.0～10.0。在酸碱环境中，固定化酶稳定性高于游离酶。在最适pH缓冲体系中，37℃储存稳定性明显提高。重复使用固定化酶水解酪蛋白8次，回收酶活力约为90％。 研究了硅胶固定化胰蛋白酶和单宁酸(TA)及卵清蛋白酶抑制剂(TI)的相互作用，通过酶活抑制测定方法和紫外分光光度法测定了TA及TI与固定化胰蛋白酶作用的最适浓度与最适反应时间。在pH8.0 Tris-HCl、pH2.4的甘氨酸-HCl及含有1mol/mLNaCl的Tris-HCl三种缓冲液中，TA和TI与固定化酶作用的平衡常数KA和结合位点数n。结果表明:TA和TI对固定化胰蛋白酶都有不同程度的抑制作用，当反应体系中TA的浓度为7.5×10-6mol/L时，固定化酶活力为91.1U，抑制率大约为50％。当TI的浓度为150μg/mL时，固定化酶剩余活力为96.3U，其抑制率约为43.15％。TA及TI与固定化胰蛋白酶最适反应时间分别为30s和60min。与在pH8.0 Tris-HCl的缓冲液中相比，在pH2.4的甘氨酸-HCl和含有1mol/mL NaCl Tris-HCl的缓冲液下，TA和TI与固定化胰蛋白酶结合力较弱，TI与固定化酶的结合为点数n大约降低了100倍;而TA与固定化酶结合的平衡常数KA则下降了100倍。 采用自制的固定化胰蛋白酶分离柱，分别分离了0.5mg的TA和TI，分离效果较好，得到的组分单一，且具有胰蛋白酶抑制活性。收集到的TA总量为0.399mg，TI总量为0.352mg。回收率分别为79.8％和70.4％。同时，对大豆蛋白酶抑制剂粗提液和混有人血清的卵清蛋白酶抑制剂混合液进行了分离纯化，得到了具有抑制活性的蛋白酶抑制剂。经过固定化胰蛋白酶的分离纯化，卵清蛋白酶抑制剂的纯化倍数提高了10.26倍，将收集到具有活性的组分进行SDS-PAGE电泳分析，结果表明:人血清与卵清蛋白酶抑制剂的混合液，经过0～1mol/L NaCl梯度洗脱后，蛋白带已明显减少，再经过pH3.0～8.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液洗脱后，电泳谱带为单一谱带，纯化效果比较明显。