大豆ABA受体基因GmPYLs和拟南芥DNA甲基化基因DTF1的功能研究

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:s8583527
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本论文包括大豆(Glycine max)的ABA受体基因GmPYLs和拟南芥(Arabidopsis thaliana)DNA甲基化基因DTF1这2部分研究内容,分别取得了如下研究结果:(1)ABA(abscisic acid,脱落酸)是一种重要的植物激素,对植物的生长、发育和响应环境胁迫起到重要的作用。最近发现拟南芥PYR/PYLs/RCARs(Pyrabactin Resistance/PYR1-Like/Regulatory Component of ABA Receptor)家族蛋白能够结合ABA,所以被认为是ABA受体基因。目前大多研究集中在一个或者几个ABA受体基因,并且主要在几个模式植物如拟南芥和水稻(Oryza Sativa)中进行,目前尚未系统地研究大豆ABA受体。本研究从大豆中克隆了21个ABA受体基因(GmPYR/PYLs/RCAR,命名为GmPYLs)。在烟草(Nicotiana benthamiana)瞬时转化系统中,所有的这些蛋白均定位在细胞质和细胞核中。酵母(Saccharomyces cerevisiae)双杂交表明大豆GmPYLs能够和2个大豆内源的蛋白磷酸酶2C(protein phosphotase2C,PP2C)及拟南芥PP2C基因AtABI1发生依赖或者不依赖ABA的互作。进一步发现GmPYLs和大豆PP2C以及AtABI1的互作对ABA的激素依赖并不总是由CL2区域保守的异亮氨酸决定,这种互作对于ABA的依赖可能是由GmPYLs和PP2C基因共同决定。在拟南芥ABA受体三突变体(pyr1;pyl1;pyl4)中,过表达GmPYL1基因能够部分地互补其对ABA不敏感的性状。GmPYL1基因在拟南芥中具有ABA受体的功能,说明在大豆和拟南芥中ABA受体基因是保守的。(2)RNA介导的DNA甲基化(RNA-directed DNA methylation,RdDM)是植物体内中重要的DNA甲基化的全新路径。DNA甲基化造成基因组中许多内源位点的转录沉默,大多数位点是转座子区域。本研究采用正向遗传筛选方法,从拟南芥中鉴定出RdDM路径上一个新元件,该元件被命名为DNA绑定转录因子1(DNA-binding transcription factor1,DTF1)。dtf1突变能够解除一些RdDM靶位的转录沉默,并且减少靶位点的24-nt的siRNA积累。在dtf1突变体中,solo-LTR位点转录沉默的解除伴随着siRNA积累下降,但甲基化水平没有下降。这些研究表明,DTF1是非典型的RdDM路径元件,具有依赖DNA甲基化和不依赖DNA甲基化2种路径造成基因沉默的特征。另外,除DNA甲基化外,siRNA还可导致一些尚不明确的表观遗传学修饰,从而造成转录水平的基因沉默。
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