针对一株副溶血弧菌的消毒剂筛选及其应用参数的高通量研究

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ulvme2000
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消毒剂作为一种能有效杀灭抑制病原的产品,担负着防治水产养殖病害的重要使命,参与了整个水产养殖过程,但在实际生产中经常因为消毒剂种类选择错误或使用方式不当,导致不能达到预期的消毒效果,因此,评估消毒剂的应用参数对指导生产有重要的现实意义。本文以一株引起对虾的急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)作为研究对象,创新性地运用高通量筛选技术对生产中常用的各类消毒剂进行筛选研究,极大地提高了研究的速度和准确性,并通过体外抑菌实验、安全浓度实验、回归验证实验等,整理分析数据得到以下结果:(1)以一株副溶血弧菌作为研究对象,比较了MTT比色法、ATP生物发光法和高通量生长曲线法这3种方法在活细菌高通量计数上的应用效果。用96孔培养板进行不同浓度细菌活菌计数,确定了3种方法在副溶血弧菌活菌计数的标准曲线和线性范围。结果显示,副溶血弧菌的MTT比色法以DMSO溶解的MTT产物甲瓒在555 nm的吸光度(OD555)为计数依据,活菌数的对数[Log(C)]与Log(OD555)线性关系的标准曲线为Log(C)=1.0478Log(OD555)+8.0575,相关系数R2=0.9968,线性检测范围是7.8×1062.5×108cfu/mL;ATP生物发光法以ATP产生的相对发光值(RLU)为计数依据,Log(C)与Log(RUL)线性关系的标准曲线为Log(C)=0.9593Log(RLU)+0.9934,相关系数R2=0.9990,线性检测范围是1×1043×108cfu/mL;高通量生长曲线法以生长曲线达到拐点的时间(Ts)为计数依据,Log(C)与Ts线性关系的标准曲线为Log(C)=-0.8838Ts+9.0834,相关系数R=–0.9976,线性检测范围是1×1001×107 cfu/mL。用3种方法对实际菌液测量并与平板计数法比较表明,ATP生物发光法与高通量生长曲线法有很好的准确性,MTT比色法准确度稍差;而高通量生长曲线法有最宽的线性范围,也最合适高通量测定。(2)通过16种消毒剂对副溶血弧菌进行消毒试验进行筛选发现,消毒效果最好的是聚六亚甲基双胍盐酸盐,过氧化氢的效果次之;氯制剂的消毒效果比碘制剂的消毒效果好;复方制剂的消毒效果要好于单一制剂。多功能的改底调水的消毒剂过硫酸氢钾、生石灰,以及几种中草药消毒剂的消毒效果较差,试验浓度下尚不能对副溶血弧菌进行完全杀灭。通过消毒剂作用时间的实验发现:大部分消毒剂在对副溶血弧菌进行消毒2h时可以达到99%的杀灭率,超过2h后消毒效果逐渐维持稳定;聚六亚甲基双胍盐酸盐也是消毒作用时间最快的消毒剂,消毒效果最差的聚维酮碘的消毒作用时间也最慢;不同种类消毒剂受消毒时间的影响程度不同,复方制剂的消毒效果也始终好于单一制剂。通过比较消毒剂在不同温度下消毒效果来看:低温时各类消毒剂消毒效果明显低于高温效果,并且在低温时,各类消毒剂的消毒效果相差较小;通过比较分析6种消毒剂的杀灭率可以发现,效果越好的消毒剂受温度影响越小。(3)通过对聚六亚甲基双胍盐酸盐,联合立克,戊二醛,聚维酮碘4种消毒剂对凡纳滨对虾无节幼体5期的急性毒性研究表明:四种消毒剂对无节幼体的24h LC50分别为:1.07mg/L,0.20mg/L,0.43mg/L,2.27mg/L;安全浓度分别为:0.11mg/L,0.02 mg/L,0.04 mg/L,0.23 mg/L。由此可见,4种消毒剂对凡纳滨对虾无节幼体安全性最好的是聚维酮碘,安全性最差的是联合立克。本文的安全性评价实验补充了聚六亚甲基双胍盐酸盐,联合立克,戊二醛这三种消毒剂对凡纳滨对虾无节幼体的急性毒性研究的欠缺,为消毒剂在实际生产中的应用提供了理论依据。
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