磁性氧化硅复合微球表面氨基的定量检测方法研究

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本课题研究的目的是要建立一种应用于氧化硅包覆磁球表面微量氨基密度的检测方法。在对文献进行充分调研的基础上,选择了荧光胺法以及ITL/BCA法作为主要研究的两种方法。本文首先以实验室制备的氨基改性氧化硅磁球为待检测物,建立基于氧化硅磁性微球的荧光胺定量检测表面氨基基团密度的方法。通过实验选择反应体系pH值为8.0,标准溶液与荧光胺反应时间为20min,磁性微球样品水解反应60h,优化并建立了基于氧化硅磁性微球表面氨基的荧光胺定量检测方法,对检测方法进行批内、批间偏差的评价,并且对自制的氧化硅磁性微球表面氨基进行测试。结果显示,实验的批间误差小于25%,批内误差小于10%。标准曲线的最低检出值为0.074mmol/g。此方法基本可以满足低密度氨基样品的检测需要,并且具备较好的准确性及稳定性。其次,以本实验室制备的氨基改性氧化硅磁球为待检测物,建立了基于氧化硅磁性微球的ITL/BCA定量检测固相载体表面氨基基团方法。通过实验,选择样品反应最佳温度为60℃,反应时间为1h,ITL试剂最佳浓度为40mM,研究了使用BCA试剂与MicroBCA试剂对于反应的差别,优化并建立了基于氧化硅磁性微球表面氨基的荧光胺定量检测方法,对检测方法进行批内、批间偏差的评价,并且对自制的氨基氧化硅磁性微球、氨基二氧化硅微球和PEI接枝二氧化硅微球表面氨基进行测试。结果显示,此方法基本可以满足低密度氨基样品的检测需要,并且具备较好的准确性及稳定性。最后,在已经建立的ITL/BCA方法基础上,提出了差减法,并确定了此方法的最佳反应时间为3h,实验结果与ITL/BCA法所测结果具有相同的数量级,并且避免了ITL/BCA法中样品本身干扰的问题。
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