七鳃鳗是无颌类脊椎动物的代表,它的进化地位处于无脊椎动物与脊椎动物之间,它有着独特的进化地位和可变淋巴受体VLR介导的适应性免疫的防御体系,所以受到免疫学家的注意。VLR介导的适应性免疫系统分为3种不同的亚型(VLRA、VLRB、VLRC),七鳃鳗的VLRB细胞更接近于B淋巴细胞,VLRA、VLRC细胞接近于T淋巴细胞。因此对于VLRB的研究具有深刻的意义。本文构建了七鳃鳗pColdⅠ-VLRB原核重组表达质粒,并进行纯化得到高纯度的重组包涵体蛋白,作为抗原进行免疫。制备特异性和效价较高的抗七鳃鳗VLRB兔多克隆抗体,VLRB多抗的制备为后续的功能实验提供了便利的条件。文章还构建了七鳃鳗pIRES2-AcGFP1-Nuc-VLRB真核重组表达质粒,并通过脂质体转染的方法,将VLRB的真核重组质粒转染到哺乳细胞293T细胞中,通过免疫荧光的方法确定VLRB在293T细胞的胞浆中表达,用WB的方法确定VLRB表达于293T细胞的分泌液中,收集转染72h后的细胞分泌液经过亲和层析纯化的方法,获得了可溶的VLRB蛋白,为VLRB后续功能的研究排除了原核表达没有转录后修饰和包涵体表达等对VLRB功能的影响。通过WB、免疫组化、免疫荧光等方法鉴定了VLRB在七鳃鳗组织中的表达情况与定位分析,结果显示VLRB在血清、类淋巴细胞、肠、肝、肾、鳃、神经轴体、心脏等组织中都有表达,且VLRB在鳃、神经轴体、肾等组织中的表达量相对较高。用LPS抗原刺激七鳃鳗机体后在肝脏、肠、鳃等组织中VLRB的表达量与刺激前比较出现了显著性的差异,结果表明VLRB可能是七鳃鳗行使免疫功能的重要参与者。通过验证VLRB对MCF-7细胞、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌没有杀伤作用,此结果可能说明VLRB不能直接参与杀伤功能,通过鉴定VLRB与C1q和C3,intelectin免疫分子都存在相互作用,可能说明VLRB协同这些免疫分子行使免疫功能。综上所述可知在七鳃鳗中VLRB不能直接参与病原体杀伤功能,它可能是通过与其它分子共同作用协同行使免疫功能,这为我们后续七鳃鳗免疫系统的研究打下了坚实的理论基础