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第一部分肾衰大鼠的心肌纤维化及心肌凋亡目的:构建肾衰大鼠模型,观察肾衰大鼠的心肌纤维化和心肌凋亡方法:1.我们构建了 5/6肾切除的肾衰大鼠模型,分为手术组和空白对照组2.测定肾衰大鼠血清肾功能,尿素氮,尿毒素,硫酸吲哚酚(indophenol sulfate,IS)水平3.取心脏组织制备石蜡切片,Masson观察心肌纤维化情况,Tunel染色观察心肌凋亡情况。结果:1.相比于对照组,肾衰组大鼠血清肾功能,尿素氮及IS浓度均显著提高。2.Masson染色提示,肾衰组大鼠心肌呈弥漫性纤维化纤维化改变。3.Tunel结果提示肾衰组大鼠心肌凋亡率(11.2±1.1%)相比于对照组(3.6±0.83%)差异显著(P<0.01).结论:1.肾衰组大鼠肾功能相关指标均提升显著,提示肾衰模型建造成功。2.肾衰大鼠导致心肌纤维化及心肌凋亡发生,IS可能参与其中。第二部分IS诱导心肌细胞凋亡的发生目的:使用IS刺激H9C2心肌细胞,观察不同时间,不同浓度作用后心肌细胞凋亡情况。方法:1.用不同浓度的IS(50,100,250,500,1000 μ mol/1)刺激H9C2心肌细胞3h提取心肌细胞蛋白,免疫印迹法观察凋亡相关蛋白(Bax,Bcl-2,Caspase-3)的表达。2.用500 μmol/l的IS干预H9C2心肌细胞不同的时间(15min,30min,1,3,6,12h)后观察凋亡蛋白表达水平。结果:1.在浓度梯度中,Bax,Caspase-3表达逐渐增多,Bcl-2表达逐渐减少,组间差异显著(P<0.05)。2.在时间梯度中,Bax,Caspase-3表达逐渐增多,Bcl-2表达逐渐减少,组间差异显著(P<0.05)。结论:IS可以诱导心肌细胞凋亡,随着浓度的增加或者刺激时间增加,凋亡表达越多。第三部分激活PI3K/Akt信号通路后IS诱导心肌细胞凋亡减少目的:观察PI3K/Akt磷酸化水平表达,初步探讨IS通过PI3K/Akt介导心肌凋亡的机制方法:1.不同时间,不同浓度的IS干预H9C2后,蛋白印迹观察PI3K/Akt磷酸化水平。2.使用PI3K激活剂后,蛋白印迹测定H9C2心肌细胞中凋亡蛋白的表达以及磷酸化水平表达。结论:1.IS一定程度上可以抑制PI3K/Akt通路的表达,促进心肌细胞凋亡。2.激活PI3K/Akt通路后,心肌凋亡减少(P<0.05),提示活化PI3K/Akt通路可能有助于抑制心肌凋亡