本论文共包括二个部分:1.蝙蝠TRAIL基因的克隆、表达、组织分布及生物学功能的研究。通过RT-PCR技术克隆蝙蝠(Pipistrellus javanicus)的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(简称bTRAIL)的全长cDNA序列,并鉴定了它的生物活性。bTRAIL的开放阅读框为843 bp,编码280个氨基酸,蛋白质的预测分子量为32.48 kDa。氨基酸序列比对显示bTRAIL含有一个TNF结构域,一个跨膜区,一个推测的糖基化位点和一个保守的半胱氨酸残基。此外,实时定量PCR(Real-time PCR)分析显示bTRAIL mRNA主要表达在蝙蝠的免疫器官脾脏中。重组pET43.1a-bsTRAIL在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达和纯化,并通过SDS-PAGE和western blot证实。在体外,经3-(4,5-二甲基吡啶-2-噻唑基)-2,5-二苯基溴化四钠(MTT)检测,TrypanBlue和流式细胞仪分析表明,纯化的可溶性TRAIL能够以剂量依赖的方式诱导Jurkat细胞和HeLa细胞的凋亡。蝙蝠TRAIL基因的研究为对蝙蝠适应性免疫和天然免疫的研究鉴定了基础。2.长江江豚TRAIL基因的克隆、表达及生物学功能研究。通过RT-PCR技术从江豚(Neophocaena phoconoides)血液中扩增肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(简称fTRAIL)的全长cDNA序列,并鉴定了它的生物活性。fTRAIL的开放阅读框为864 bp(编码288个氨基酸)。与其它物种已知TRAIL相同,fTRAIL氨基酸序列中也含有一个预测的跨膜区,一个推测的糖基化位点,一个保守的半胱氨酸残基和一个典型的TNF机构域。fTRAIL与其他已知哺乳动物马、人、狗、牛在氨基酸水平上的同源性分别为86%,79%,82%,和80%。重组的可溶性fTRAIL融合蛋白(pET43.1a-fsTRAIL)以及Nus-His6标签蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到有效表达,并且得到有效纯化。进化系统分析表明,江豚和偶蹄目有比较近的亲缘关系。体外实验,可溶性fTRAIL(fsTRAIL)蛋白能够以剂量依赖的方式诱导Jurkat细胞和HeLa细胞的凋亡。本实验的研究结果可以为以后江豚免疫系统的研究提供一定的帮助。