梅花鹿角盘是雄性梅花鹿（Cervus nippon）在锯掉鹿茸后,其角柄上剩余的骨化鹿茸基部,第二年春天当新鹿茸开始生长时,鹿角盘会自行脱落。鹿角盘也被称为鹿花盘、珍珠盘等,是吉林省特种经济动物梅花鹿的副产品。由于鹿角盘每年由鹿自然脱落产生,没有任何痛苦,因此可以以相对较低的成本获得。现代医学研究结果证明,鹿角盘具有抗炎镇痛、抗疲劳、改善性功能、提高免疫力、预防骨质疏松等活性,可用于乳腺增生、乳腺炎等疾病的治疗,蛋白和多肽类是其发挥药效作用的主要成分。根据鹿角盘已经报道的生物活性,结合急性肝损伤的发病特点和临床病理症状,提出了鹿角盘中有效成分可以通过抗炎和抗氧化应激的作用对急性肝损伤具有预保护作用的假设。本文以梅花鹿角盘为实验原料,通过提取分离得到蛋白类有效成分,进行体外和体内抗急性肝损伤药理活性和作用机制研究。主要研究内容和结果如下:1、鹿角盘有效成分的提取分离。结合鹿角盘蛋白类成分的理化性质,通过水煎煮法和弱碱盐冷浸法两种方法对鹿角盘中蛋白类成分进行提取,采用硫酸铵沉淀法得到粗蛋白,通过透析法对粗蛋白进行除盐处理。采用Sephadex G-100凝胶柱对粗蛋白进行分离,通过紫外分光光度计在280 nm波长下检测洗脱曲线,得到了四种不同的蛋白组分,分别命名为R1、R2、L1和L2。通过SDS-PAGE法和BCA法对分离纯化后的各蛋白组分进行理化性质鉴别,为后续药理实验做准备。2、鹿角盘蛋白组分的体外抗炎活性筛选及作用机制研究。首先测定各蛋白组分对RAW264.7细胞的细胞毒性,结果各蛋白组分均无明显的细胞毒性,选取0.5、2、10μg/m L作为细胞给药浓度进行后续药理活性实验。根据不同浓度LPS对RAW264.7细胞增殖活性的影响,最终选用1μg/m L作为造模浓度。给药方式为预给药4 h,LPS造模24h。利用Griess法对RAW264.7细胞培养基中NO含量进行测定,从而筛选出了抗炎活性最好的R1蛋白组分。通过测定RAW264.7细胞内IL-6、IL-1β和TNF-α含量的变化,验证了R1蛋白组分的抗炎活性。最终,免疫印迹分析结果显示R1蛋白组分能够通过抑制LPS诱导的RAW264.7细胞内NF-κB和MAPK信号通路的激活,进而抑制细胞内各种炎症因子的产出,来发挥抗炎作用。3、鹿角盘R1蛋白组分对小鼠急性肝损伤的防护作用及其作用机制研究。将40只ICR小鼠随机分成5组,空白对照组:小鼠灌胃等体积生理盐水,连续10天。LPS/DGal N模型组:前9天给予等体积生理盐水,第10天称重后根据小鼠体重计算LPS（50μg/kg）和D-Gal N（800 mg/kg）的给药量并进行腹腔注射。R1（50、100、150mg/kg）组:通过灌胃给药连续给予小鼠相应剂量的R1,持续10天。在第10天,R1给药后1小时,根据小鼠体重计算LPS和D-Gal N的给药量并进行腹腔注射。注射后6 h,对小鼠进行解剖,采集血液同时固定肝脏组织。另一组小鼠以同样的方法用LPS/D-Gal N对小鼠建立急性肝损伤模型后,模型组小鼠在第七个小时全部死亡,而R1蛋白组分给药组小鼠在第十二个小时,存活率分别提升了12.5%、25%和50%。R1蛋白组分呈剂量依赖性的降低了肝脏指数。H＆E染色观察结果表明,R1蛋白组分明显减轻了LPS/Gal N造成的肝细胞坏死,炎性细胞浸润。小鼠血清学检测发现R1蛋白组分显著减弱了LPS/Gal N造成的转氨酶AST和ALT水平异常升高,以及炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β的水平异常变化。小鼠肝脏组织匀浆液测定结果显示,R1蛋白组分可显著抑制LPS/D-Gal N诱导引起的肝脏组织中MDA活性异常上升,显著恢复SOD、GSH和CAT活性。免疫组化和免疫荧光的结果显示,R1蛋白组分可明显抑制LPS/D-Gal N诱导引起的小鼠肝组织中i NOS、COX-2和4-HNE蛋白的异常表达。免疫印迹分析结果显示R1蛋白组分可能是通过抑制LPS/DGal N诱导的MAPK活化和NF-κB通路的相关蛋白表达来进行肝脏保护的。