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原生质体技术是新兴的细胞工程技术,在去除细胞壁的基础上,可进行细胞杂交,有利于突破种、属界限、缩短育种周期、可实现远缘物种基因融合。本试验从侧耳属真菌品种中,选取平菇、秀珍菇、鲍鱼菇三个种类,研究了原生质体制备和再生条件,包括稳渗剂种类、菌龄、酶解温度及时间、再生培养基种类。试验设计采用单因素试验,确定了平菇、秀珍菇、鲍鱼菇原生质体制备、再生的最佳条件并筛选了优势的单核菌株,为冀中南地区侧耳属菌株选育提供技术应用依据。⑴平菇品种选用性状优良的“680”为材料。研究结果表明,原生质体制备产量最高的条件是以采用固体培养菌丝的方式,0.6mol/L蔗糖做稳渗剂,取0.03g菌丝,在浓度为2%的溶壁酶酶解液中30℃酶解2.5h,菌龄8d,获得原生质体量为2.6×10~7个/mL。优化条件下得到的原生质体再生时间7d,再生率达6%;⑵秀珍菇品种选用“中农袖珍”为材料,研究结果表明,原生质体产量最高的条件是采用固体培养菌丝方式,以0.6mol/L蔗糖做稳渗剂,取0.04g菌丝,浓度为2%的溶壁酶酶解液中35℃酶解2h,菌龄为8d,获得原生质体量为2.4×10~7个/mL。优化条件下得到的原生质体再生时间6d,再生率达0.7%;⑶以本实验室保存的鲍鱼菇菌丝为材料,研究结果表明,原生质体产量最高的条件是液体静置培养的菌丝体,以0.6mol/L蔗糖做稳渗剂,以0.04g菌丝量在浓度为2%的溶壁酶酶解液中30℃酶解2h,菌龄为10d,获得原生质体量为1.2×10~7个/m L。优化条件下得到的原生质体再生时间12d,再生率达0.3%;本试验在侧耳属品种(平菇、秀珍菇、鲍鱼菇)中,原生质体制备与再生的基础上筛选出优势单核菌株,以筛选出的平菇、鲍鱼菇的单核菌株作为亲本菌株,利用融合剂PEG进行融合,最终获得两株融合子R1、R2。通过显微镜观察锁状联合和拮抗试验,从菌丝特征和生化水平上确定了融合子。通过酯酶同工酶证明融合子R1、R2具有双亲的特异条带,ISSR分子标记表明融合子含有双亲的遗传物质。