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禽流感（Avian Influenza，AI）是由A型流感病毒引起的禽类的感染和/或疾病综合征，分为高致病性禽流感（HPAI）和低致病性禽流感（LPAI）。H9N2亚型禽流感为低致病力禽流感，1994年我国大陆首次从鸡体内分离出H9N2亚型禽流感病毒。此后，该亚型病毒开始在我国鸡群内蔓延，给我国的养禽业造成了巨大的经济损失。接种疫苗是预防禽流感发生与传播最有效的手段。由于经济和技术因素的制约，尚未有成功的禽流感细胞疫苗产品上市，为此，本研究使用中国农科院上海兽医研究所禽流感流行病学实验室提供的MDCK HA-2细胞培养含有H9亚型禽流感病毒（AIV）HA和NA基因的SH441HANAPR8（NS mutant）重组病毒。培养环境为37℃、含5%CO2恒温箱中。首先确定病毒感染细胞的最佳剂量，然后采用直接接种法与病毒吸附两种方法接毒，比较这两种方法接毒后所产生的病毒HA滴度。接下来使用2%NCS DMEM培养液与无血清培养液两种病毒维持液抚育接种病毒的细胞，比较在其他条件相同的情况下两种不同的维持液所产生的病毒HA滴度的高低。在上述接毒条件都确定之后，在病毒维持液中添加TPCK-胰酶检验其是否影响细胞接毒后的病毒HA滴度。最后进行MDCK与MDCK HA-2两种细胞在相同条件下接种病毒，比较二者接毒后所产生的病毒HA滴度。在确定了病毒最佳增殖条件之后，制备出了高滴度的病毒株，并进行扩大培养。对其进行灭活和乳化制备成灭活苗，并将该灭活苗免疫3周龄的SPF鸡只，从而检验灭活疫苗的免疫效果及其攻毒保护率。结果显示，以30000TCID50的病毒剂量接种MDCK HA-2细胞，采用直接接种法，使用2%NCS DMEM培养液代替无血清培养液，无需添加TPCK-胰酶，感染48h后收毒，测得病毒的HA滴度为10Log2。在细胞扩增而来的SH441HANAPR8（NSmutant）重组病毒里加入终浓度为0.1%的甲醛进行灭活。结果显示，37℃条件下灭活24h的效果最佳。灭活好的H9AIVSH441HANAPR8（NSmutant）与佐剂Montanide ISA70VG乳化制备成灭活苗，以0.05、0.1、0.2、0.3mL/只的剂量，分别胸部肌肉注射免疫3周龄的SPF鸡，并于免疫后21d静脉感染A/Chicken/Shanghai/441/2009（H9N2）AIV。结果显示，该疫苗的最小免疫剂量为0.2mL。此外，研究还发现，当HI抗体效价≥25时，疫苗对鸡只的攻毒保护率达到100%。总之，本研究所禽流感流行病学实验室制备的H9N2AIV细胞灭活苗能够对鸡只提供较好的免疫保护，具有较大的商业开发潜能。