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目的:在全世界范围内,肺癌的发病率及死亡率均位居恶性肿瘤的首位。在全部的肺癌中,非小细胞肺癌约占85%左右,而肺腺癌是非小细胞肺癌中最主要的病理类型。尽管肺癌的诊断和治疗在近些年有了一定的进步,但由于侵袭性强、易发生转移,肺癌的预后仍然较差。因此,探讨研究肺腺癌的功能基因与生物学特性的关系,进一步了解其增殖及转移机制,寻找更多有效的抗癌靶点,对于设计合理的治疗药物,控制肺腺癌的发生发展具有重要意义。肿瘤的发生与发展是复杂的分子网络调控下的多阶段、多因素、多步骤的过程。竞争性内源RNA假说被提出后,人们对lncRNA以及miRNA的调控机制又有了新的认识。近年来,LncRNA FBXL19-AS1在肿瘤发生发展过程中的重要作用受到了越来越多的关注,但其在肺腺癌发生发展中的分子机制仍未明确。miR-203a-3p是一个肿瘤抑制miRNA,其抗肺癌的作用已经明确。本研究将结合体内体外实验探讨LncRNA FBXL19-AS1是否可以调控miR-203a-3p,从而影响其下游靶基因的表达,促进肺腺癌的增殖和转移,以期为阐明LncRNA FBXL19-AS1/miR-203a-3p信号通路及肺腺癌的发病机制奠定基础,进而为临床提供肺腺癌的一个潜在的治疗靶点。研究方法:1、临床实验部分。应用qRT-PCR来检测LncRNA FBXL19-AS1和miR-203a-3p在肺腺癌组织及其对应的癌旁组织中的表达情况。2、细胞实验部分。首先进行了细胞培养、细胞株的筛选、稳转细胞系的构建等基础工作。然后,通过CCK-8实验、流式细胞术、Transwell实验、细胞划痕实验以及Western blot来评价Lnc RNA FBXL19-AS1对肺腺癌细胞增殖、周期、侵袭、迁移以及对其下游致瘤相关因子表达的影响。之后,使用双荧光素酶实验来验证Lnc RNA FBXL19-AS1与miR-203a-3p的结合情况,同时也构建了新的稳转细胞系。最后,再次通过CCK-8实验、Transwell实验、细胞划痕实验以及Western blot来验证LncRNA FBXL19-AS1是否通过miR-203a-3p对肺腺癌细胞增殖、侵袭、迁移以及对其下游致瘤相关因子的表达产生影响。3、动物实验部分。首先应用裸鼠成瘤实验来评估LncRNA FBXL19-AS1对肺腺癌体内生长的影响。然后,使用qRT-PCR来检测LncRNA FBXL19-AS1和miR-203a-3p在瘤体组织中的表达情况。最后,通过免疫组织化学来评价LncRNA FBXL19-AS1对肺腺癌体内增殖的影响。4、统计方法。根据收集的临床信息及实验结果的数据性质,本研究中所采用的统计方法有:“卡方检验”、“配对t检验”、“非配对t检验”、“普通单因素方差分析”、“博菲罗尼多重比较检验”、“双因素方差分析”及“图基多重比较检验”等。结果:1、临床实验部分。通过qRT-PCR来检测肺腺癌组织和对应癌旁组织中RNA的表达水平。结果显示,与癌旁组织相比,肺腺癌组织中LncRNA FBXL19-AS1的表达水平明显增高(P<0.01),而miR-203a-3p的表达水平明显降低(P<0.01)。将Lnc RNA FBXL19-AS1及miR-203a-3p的表达情况与各项临床病理因素结合在一起进行分析,发现LncRNA FBXL19-AS1的表达越高,肺癌越有增大的趋势(P<0.01),淋巴结越有转移的趋势(P<0.01),同时肿瘤越有分期较晚的趋势(P<0.01)。miR-203a-3p的表达越低,肺癌越有增大的趋势(P<0.01),淋巴结越有转移的趋势(P<0.01),同时肿瘤越有分期较晚的趋势(P<0.01)。2、细胞实验部分。首先,选择了细胞株NCI-H1975、SPC、NCI-H1299及A549中LncRNA FBXL19-AS1的表达量相对较高的NCI-H1975(1.00)和SPC(0.69)来进行后续的实验。在细胞株中转染了FBXL19-AS1 shRNA和NC shRNA之后,使用qRT-PCR来检测各组RNA的表达水平,结果发现在NCI-H1975和SPC中都出现了LncRNA FBXL19-AS1的表达降低(P<0.01和P<0.01)及miR-203a-3p的表达增高(P<0.01和P<0.01)。CCK-8的实验结果显示,干扰LncRNA FBXL19-AS1的表达会降低NCI-H1975和SPC的增殖速度。流式细胞仪的结果显示,干扰LncRNA FBXL19-AS1的表达会使更多的NCI-H1975和SPC处于G0/G1期(P<0.01和P<0.05)。Transwell实验的结果显示,干扰LncRNA FBXL19-AS1的表达会降低NCI-H1975和SPC的侵袭性(P<0.01和P<0.01)。细胞划痕实验的结果显示,干扰Lnc RNA FBXL19-AS1的表达会降低NCI-H1975和SPC的迁移性(P<0.05和P<0.01)。Western blot的实验结果显示,干扰LncRNA FBXL19-AS1的表达会下调NCI-H1975和SPC中survivin(P<0.01和P<0.01)、DLX5(P<0.01和P<0.01)、E2F1(P<0.01和P<0.01)及ZEB2(P<0.01和P<0.01)的表达。双荧光素酶实验的结果表明,miR-203a-3p是野生型LncRNA FBXL19-AS1的靶序列,而不是突变型Lnc RNA FBXL19-AS1的靶序列。然后,构建了新的稳转细胞系:FBXL19-AS1shRNA+NC inhibitor和FBXL19-AS1 shRNA+miR-203a-3p inhibitor。CCK-8的实验结果显示,下调miR-203a-3p的表达会逆转Lnc RNA FBXL19-AS1低表达时对NCI-H1975和SPC增殖的抑制作用(P<0.01和P<0.05)。Transwell实验的结果显示,下调miR-203a-3p的表达会逆转LncRNA FBXL19-AS1低表达时对NCI-H1975和SPC侵袭的抑制作用(P<0.01和P<0.05)。细胞划痕实验的结果显示,下调miR-203a-3p的表达会逆转LncRNA FBXL19-AS1低表达时对NCI-H1975和SPC迁移的抑制作用(P<0.01和P<0.05)。Western blot的实验结果显示,下调miR-203a-3p的表达会逆转LncRNA FBXL19-AS1低表达时对NCI-H1975和SPC中survivin(P<0.01和P<0.01)、DLX5(P<0.05和P<0.01)、E2F1(P<0.01和P<0.01)及ZEB2(P<0.01和P<0.01)表达的抑制作用。3、动物实验部分。裸鼠成瘤的实验结果显示,干扰NCI-H1975和SPC中LncRNA FBXL19-AS1的表达会降低它们在体内状态下的生长速度。使用qRT-PCR检测瘤体组织中RNA的表达情况,结果显示,干扰NCI-H1975和SPC中Lnc RNA FBXL19-AS1的表达会下调它们在体内状态下LncRNA FBXL19-AS1的表达(P<0.01和P<0.01),同时会上调它们在体内状态下miR-203a-3p的表达(P<0.01和P<0.01)。免疫组化的结果显示,干扰NCI-H1975和SPC中LncRNA FBXL19-AS1的表达会降低它们在体内状态下的增殖速度(P<0.01和P<0.01)。结论:本研究通过qRT-PCR、CCK-8、流式细胞、Transwell、细胞划痕、Western blot、双荧光素酶、裸鼠成瘤以及免疫组织化学等实验方法,在临床实验、细胞实验以及动物实验三个层面,兼顾体内和体外环境,证实了LncRNA FBXL19-AS1通过miR-203a-3p对肺腺癌的增殖、侵袭、迁移以及对其下游致瘤相关因子的表达产生影响。本研究首次呈现了ceRNA机制中的一个崭新的信号通路,即Lnc RNA FBXL19-AS1可以通过调控miR-203a-3p来调节相关基因的表达,并进一步影响肺腺癌的增殖和转移。该发现将会为设计肺腺癌的全新治疗策略,以及改善其预后提供新的思路。然而,本研究也有其不足之处等待进一步的改进。虽然通过实验找到了一些癌症相关基因,但每个基因在细胞层面上的更加精确的功能和作用机制仍然需要更进一步的探究。同时,在FBXL19-AS1/miR-203a-3p通路下游的,其它可能影响肺腺癌增殖和转移的靶基因也应该被涵盖其中。在未来的研究中,相关的研究重心应该放在更深层次的分子机制的分析上。