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本研究基于TaqMan探针技术,应用荧光定量RT-PCR对猪繁殖与PRRSV(FJ06株)进行检测,并应用此方法对人工感染PRRSV(FJ06株)的猪体内各组织中PRRSV的含量进行定量检测,旨在建立一种快速高效的诊断方法,为PRRSV(FJ06株)的流行病学、致病机理等相关领域的研究提供依据。PRRSV(FJ06株)NSP2基因的克隆根据GenBank的变异性PRRSV和普通PRRSV的NSP2片段基因序列,设计并合成一对引物。应用本实验室保存的PRRSV FJ06株,通过RT-PCR扩增出目的基因片段,将目的片段和PMD-18T Vector载体连接后,转化DH5α。试验结果获得预期的重组质粒标准品。PRRSV(FJ06株)的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立参照GenBank的变异性PRRSV和普通PRRSV的NSP2段基因序列,设计并合成一对特异引物和TaqMan探针。以质粒PMD-NSP2为模板,通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒PMD-NSP2为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线。试验结果:建立了PRRSV(FJ06株)的荧光定量RT-PCR检测方法。建立的方法灵敏度可达6.24×102拷贝/μL,比常规PCR灵敏度高10倍,而与普通PRRSV、PCV2、PRV、HCV、TGE没有交叉反应,具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点,适合于变异性PRRSV的流行病学调查和临床诊断。PRRSV(FJ06株)在人工感染猪体内各组织中含量的测定应用TaqMan荧光定量RT—PCR检测技术对PRRSV(FJ06株)人工感染及其同居感染猪在第14d时体内不同器官组织中的病毒RNA进行定量检测。结果表明,被测定的14种器官组织均含有PRRSV(FJ06株)。心、肺、肺门淋巴结、扁桃体、脑、颌下淋巴结和血液中PRRSV(FJ06株)的含量较高。阴性对照猪的14种器官组织均未检测到PRRSV(FJ06株)。结论:1)、建立了PRRSV(FJ06株)的荧光定量RT—PCR检测方法。该方法准确、快速、高效、无污染。2)、应用荧光定量RT—PCR测定了PRRSV(FJ06株)在体内的分布,为PRRSV(FJ06株)的流行病学、发病机理等相关领域的研究提供依据。