红景天为景天科植物大花红景天Rhodiola crenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba的干燥根和根茎,收载于2015年版《中国药典》,主要功效为益气活血、通脉平喘、治疗心血管疾病。中药破壁饮片是通过现代粉碎技术将植物类中药材细胞壁打破,使其粒径达45 μm及以下、目数达300目及以上,供直接口服的新型粉末中药饮片,它保留了中药材及中药饮片的全成分用药特点,具有物质基础不变、利用率提高、剂量大幅减少、质量均匀可控、使用方便等特点和优势。目前,红景天主要以传统饮片形式存在,具有品质不均、质量难以控制、煎煮服用方式繁琐等缺陷。红景天破壁饮片与传统饮片相比,由于细胞壁破碎,是否会带来其化学成分、有效成分组成和含量的变化;且红景天本身药性较强,经加工成破壁饮片后,若所含的有效成分快速大量释出,与此同时,难溶性成分也可能会随细胞壁的破碎溶出增加,其安全隐患问题、有效剂量的探索问题随之出现。因此,本研究通过对比红景天破壁饮片与传统饮片指纹图谱的差异、红景天破壁饮片与传统饮片对缺血缺氧H9c2心肌细胞的保护作用,旨在为后期红景天破壁饮片安全性隐患、有效剂量的探索提供研究依据,对保障红景天破壁饮片的质量,及药用资源的节约具有重要的意义。目的:(1)建立并对比红景天破壁粉碎前后HPLC指纹图谱,从整体上、宏观上分析红景天破壁粉碎前后化学成分的差异。(2)初步探讨红景天破壁饮片与传统饮片对缺血缺氧H9c2心肌细胞的保护作用的差异。方法:(1)应用HPLC法,色谱柱为AgilentC18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:A乙腈-B 0.02%磷酸,梯度洗脱:6%A～6%A(0～18 min),6%A～20%A(18～45 min),20%A～20%A(45～55 min),20%A～22%A(55～65 min),22%A～22%A(65～90 min),DAD 检测波长 278 nm,流速 0.8 mL min-1,柱温30℃,进样量10 μL。(2)CCK-8法检测不同缺血缺氧时间对H9c2心肌细胞增殖情况及细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响以确定细胞最佳缺血缺氧干预时间;CCK-8法测定不同剂量红景天破壁饮片与传统饮片对H9c2细胞生长增殖率的影响以确定药物最佳低、中、高剂量;实验分组分别为正常组、模型组、红景天传统饮片低剂量组(0.002mg·mL-1,A1)、红景天传统饮片中剂量组(0.0200mg·mL-1,A2)、红景天传统饮片高剂量组(0.200 mg·mL-1,A3)、红景天破壁饮片低剂量组(0.002 mg·mL-1,B1)、红景天破壁饮片中剂量组(0.0200 mg·mL-1,B2)、红景天破壁饮片高剂量组(0.200 mg·mL-1,B3);CCK-8法测定红景天破壁饮片与传统饮片低、中、高剂量组对缺血缺氧H9c2心肌细胞存活率的影响;比色法检测红景天破壁饮片与传统饮片低、中、高剂量组对缺血缺氧H9c2心肌细胞培养液LDH活性及细胞内丙二醛(MDA)、三磷酸腺苷(ATP)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、肌酸激酶(CK)含量及活性的影响;RT-PCR法检测红景天破壁饮片与传统饮片低、中、高剂量组对缺血缺氧H9c2心肌细胞Bax、Bcl-2、Caspase3 mRNA相对表达量的影响;Western Blot法检测红景天破壁饮片与传统饮片低、中、高剂量组对缺血缺氧H9c2心肌细胞Bax、Bcl-2、Caspase3蛋白相对表达量的影响。结果:(1)红景天经破壁粉碎后,其色谱峰个数未见增加或减少,但3号、5号、11号、21号、22号色谱峰峰面积显著增加,其余色谱峰峰面积也有不同程度的增加。(2)与模型组比较,红景天破壁饮片低、中、高剂量组及红景天传统饮片高剂量组均可显著提高H9c2细胞的存活率(P<0.05),同时可显著降低H9c2心肌细胞培养液LDH活性及细胞内MDA、CK含量(P<0.05)、升高细胞内T-SOD、ATP含量(P<0.05),且相同浓度下,红景天破壁饮片对H9c2细胞存活率的提升在不同程度上优于红景天传统饮片。(3)RT-PCR及Western Blot检测结果显示,与模型组比较,红景天破壁饮片与传统饮片均可显著降低缺血缺氧H9c2细胞Bax、Caspase3 mRNA及蛋白相对表达量(P<0.05),升高缺血缺氧H9c2细胞Bcl-2 mRNA及蛋白相对表达量(P<0.05),且破壁红景天饮片抗细胞凋亡效果优于传统红景天饮片。结论:(1)本研究可较全面地反映红景天破壁粉碎前后化学成分的变化情况,可为后期红景天破壁饮片的安全有效性评价提供一定的依据。(2)红景天破壁饮片对缺血缺氧H9c2心肌细胞保护作用优于传统饮片,其作用机制可能与抗氧化及抑制细胞凋亡有关。