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[目的]该实验的目的在于探讨多发性骨髓瘤的部分发病机制,尤其是抑癌基因(p15基因)CpG岛甲基化在多发性骨髓瘤发生发展中的作用及其在指导治疗中的意义。[方法11.收集2009年1月至2011年6月确诊的54例初诊,复诊多发性骨髓瘤(MM)患者的骨髓标本,诊断标准参照张之南主编的《血液病诊断及疗效标准》,分型分期分组(所有入选患者来自昆明医学院第一和第二附属医院)。同时设立对照组,均为营养不良性性贫血和初诊特发性血小板减少性紫癜患者骨髓标本。采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)及重亚硫酸盐修饰后测序技术研究MM患者骨髓p15基因启动子区甲基化情况,同时利用自动测序技术对扩增产物测序分析其碱基甲基化情况,所得结果采用SPSS17.0软件包进行统计学分析。2.分别设计Real Time PCR用特异性引物m(甲基化体系)和u(非甲基化体系),进一步运用荧光实时定量PCR监测其mRNA表达情况,所得结果采用SPSS17.0软件包进行统计学分析。[结果]1、多发性骨髓瘤患者p15基因启动子区甲基化状态的研究结果显、示:在.54例多发性骨髓瘤患者中p15基因启动子区5’端甲基化15例,甲基化阳性率为27.78%;40例对照组检出5’端甲基化阳性0例,甲基化阳性率为0.00%,多发性骨髓瘤组启动子区5’端甲基化与对照组比较,差异存在统计学意义(P<0.05)。2、甲基化阳性标本行修饰后直接测序法检测结果显示:在p15基因启动子区5’端产物确实检测出碱基发生甲基化。3、p15基因启动子区CpG岛甲基化情况与MM患者的初诊、复诊、性别、年龄、分期及分组情况关系不明显,按上述临床病理特征分组,各组内比较差异均无统计学意义(各组内P值均>0.05)。4、多发性骨髓瘤患者p15基因mRNA表达情况:MM组:28.64±28.77Fold;对照组:25.79±78.16Fold; MM组与对照之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);甲基化组:28.64±19.13Fold;非甲基化组:29.86±29.24Fold;甲基化组与非甲基化组比较,差异无统计学意义(P>0.05);初诊组:23.92±26.46Fold;复诊组:36.13±27.65Fold;甲基化组与非甲基化组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]1.本文研究54例多发性骨髓瘤患者中,存在p15基因启动子区甲基化,与对照组比较具有统计学意义;其总体甲基化阳性率与初诊、复诊、性别、年龄、分期、分组无关,研究提示p15基因异常甲基化在MM的发病机制中具有一定作用。2.多发性骨髓瘤患者的p15基因mRNA表达量与对照组相比、甲基化组与非甲基化组p15基因nRNA表达量相比均无统计学差异;这提示p15基因在转录过程可能存在其他机制对其进行调节,同时需扩大样本量水进一步研究。3.初诊与复诊的MM患者的p15mRNA的检测表明,二者之间无显著统计学差异,这可能与传统的化疗药物很少具有逆转甲基化的作用有关。