在严重缺血缺氧、重度感染及酸中毒等致病因素导致重症休克的过程中,微血管对血管活性物质,如去甲肾上腺素(NE)或P物质(SP)的反应性降低,从而引起休克晚期有效循环血量减少,出现顽固性低血压、低组织灌注,严重影响了对休克的治疗及其预后,是导致重症休克患者出现多器官损伤甚至死亡的主要原因。淋巴循环是循环系统的重要组成部分,与休克的发生发展密切相关。研究表明,在休克的发展进程中,作为淋巴循环动力学基础的淋巴管的收缩功能以及对于某些血管活性物质(如NE或SP等)的反应性,均出现了早期升高、晚期降低的变化,提示淋巴管收缩功能以及反应性低下是其泵功能下降的基础。已有的研究发现,表明休克血管低反应性的发生机制与细动脉平滑肌细胞(ASMCs)线粒体结构损伤引起能量不足、导致ATP敏感性钾通道(KATP)开放与ASMCs膜超极化相关。我室前期的研究工作也发现,KATP参与了一氧化氮调节失血性休克后淋巴管泵功能的作用,那么,重症失血性休克后淋巴管低反应性的发生机制是否与线粒体损伤相关,值得深入研究。为此,本研究采用线粒体保护剂环孢菌素A(Cs A)作为干预因素,观察CsA对失血性休克大鼠淋巴管平滑肌细胞(LSMCs)线粒体超微结构以及淋巴管组织中能量代谢指标的变化,进一步观察CsA对失血性休克大鼠离体淋巴管收缩性及其对SP反应性的影响,探讨线粒体功能障碍在失血性休克淋巴管低反应性中的作用,为针对线粒体保护、调节休克淋巴管泵功能提供实验依据。首先,将16只SPF级雄性健康Wistar大鼠随机均分为假手术组(sham组,仅进行麻醉和与休克组相同的手术,不维持低血压)、假手术+CsA组(进行麻醉和手术,并在与休克+Cs A组相同的时间点注射CsA,剂量为6 mg·kg-1)、休克组(进行麻醉和手术,维持平均动脉血压40 mmHg至3 h),休克+CsA组(进行麻醉和手术,维持平均动脉血压40 mmHg 1 h后注射CsA,剂量为6 mg·kg-1)。在低血压3h或相应时间点,留取胸导管组织,去除周围脂肪组织后固定于戊二醛中,制备电镜标本,应用透射电镜观察csa对失血性休克大鼠lsmcs线粒体超微结构的作用。结果发现,休克组lsmcs的线粒体出现水肿,有明显的电子透亮区,部分呈空泡状,有特殊包囊物质生成;休克+csa组lsmcs的线粒体有部分水肿,但结构较完整,基质清楚均匀。结果提示,csa可减轻失血性休克导致的lsmcs线粒体结构损伤。随后应用36只大鼠按照上述相同的分组与实验方法,留取胸导管组织标本,超声粉碎后应用高效液相色谱方法检测与线粒体功能相关的能量代谢指标(atp、adp、amp)的含量,并计算总腺苷酸量(tan)及能荷(ec)。结果发现,休克组淋巴管组织atp、adp、amp及tan含量均显著低于假手术组,ec高于假手术组;休克+csa组淋巴管组织atp、adp、amp及tan的含量均显著高于休克组,ec与休克组相比出现了下降的趋势。结果提示,csa可减轻失血性休克引起的线粒体能量代谢功能障碍。最后,应用24只大鼠按照上述相同的分组与实验方法,留取胸导管组织,制备淋巴管环,置于微血管压力-肌动仪浴槽内,维持跨壁压3cmh2o,待淋巴管出现自发稳定性收缩后,观察并记录淋巴管收缩频率(cf)、舒张末期口径(edd)、收缩末期口径(esd)和被动管径(pd)的变化,计算淋巴管收缩幅度(ca)、泵流分数(fpf)和紧张指数(ti),用于评价淋巴管的收缩性,进而观察线粒体保护剂csa在失血性休克大鼠离体淋巴管收缩性中的作用;然后依照梯度浓度在浴槽中由低到高顺次加入梯度浓度的sp液孵育(分别为1×10-8mol·l-1、3×10-8mol·l-1、1×10-7mol·l-1、3×10-7mol·l-1),每个浓度sp均孵育3min,期间分别记录各组的cf、edd、esd、pd,并计算ca、fpf、ti,以加入梯度浓度sp前后的cf、edd、esd、pd的最大差值△cf、△ti、△ca、△fpf,作为评价淋巴管反应性的指标。结果发现,失血性休克后大鼠离体淋巴管的cf、fpf、ti降低,而给予线粒体保护剂csa提高了失血性休克后淋巴管的cf、fpf、ti;同时,休克组淋巴管在多个浓度点对sp的反应性下降,而线粒体保护剂CsA可提高失血性休克后淋巴管在多个浓度点的△CF、△TI、△FPF。研究结果提示,线粒体保护剂CsA可提高休克后淋巴管的收缩性与反应性。综上,失血性休克后LSMCs出现了线粒体结构损伤与能量生成障碍,进一步引起了淋巴管收缩性与反应性降低;线粒体保护剂CsA可减轻线粒体损伤,改善线粒体能量代谢功能,从而提高淋巴管收缩性与反应性。研究结果提示,线粒体功能障碍在失血性休克淋巴管泵功能降低的发生机制中发挥一定的作用;以CsA作为药物靶点,可进一步调控休克淋巴管的泵功能,对防治重症休克的淋巴管低反应性具有重要的意义。