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酪氨酸酶( EC 1.14.18.1)是一种含铜的氧化还原酶,它广泛存在于动植物和微生物中,与生物体内的一些色素合成直接相关。酪氨酸酶具有重要的生理生化特征,在医药、环境、食品、精细化工等领域具有广泛的用途。因此,研究酪氨酸酶的分离纯化、酶学性质具有一定的理论和现实意义。通过对几十种植物材料进行粗酶液提取、酶活力测定,确定香樟(Cinnamomum camphora (L.) Presl)果实为实验材料,确定酶活测定体系为:20 mmol/L pH 7.5Tris-HCl缓冲液,10 mmol/L L-DOPA。研究了NAA,PEG,H2O2处理对香樟叶片和果实中酪氨酸酶活性及同工酶的影响,结果表明: 10-4mol/L的NAA对果实成熟以及酪氨酸酶的酶活性都有一定的促进作用;不同的渗透压对香樟酪氨酸酶的形成和活力均呈现不同程度的影响;低浓度的H2O2(1mmol/L)处理可以诱导酪氨酸酶活力提高。香樟果实经过破碎、硫酸铵分级沉淀、Superdex TM200凝胶过滤、DEAE-纤维素阴离子交换色谱分离纯化后,得到一个电泳纯的酪氨酸酶。此酶最适pH值为7.5,最适温度为50℃,亚基分子量为43KDa。以L-DOPA为底物时,Km为12.83 mmol/ L,Vmax为180.65U/mg蛋白。该酶热稳定性较好,在60℃保温1h,仍能保持90%以上的酶活力;该酶在pH4-7的范围内稳定;添加二肽Ala-Asp和Lys-Val在80℃保温30min后,两种二肽均表现出一定程度的保护作用。提纯的香樟果实酪氨酸酶受1mmol/L抗坏血酸和1mmol/Lβ-巯基乙醇, 0.01 mmol/ L Al3+和Cu2+及乌梅提取物的强烈抑制;而0.001mmol/L Zn2+,250mmol/L EDTA和女贞果实提取物则可激活香樟果实酪氨酸酶。