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目前,对放射性环境中进行经济、高效的生物修复是一个相当活跃的研究领域。本文主要研究了农杆菌遗传转化烟草K326的主要影响因素以及辐射胁迫下pprI基因对主要保护酶基因表达的调控。
本文首先通过农杆菌介导法将pprI-EHA105转化到叶盘中,分析了农杆菌遗传转化烟草的主要影响因素。实验结果表明,农杆菌侵染烟草叶盘时,菌液OD=0.6-0.8,侵染时间25min-30min为宜,此时转化效果最好;共培养3天是烟草的最佳培养时间,转化效率最高。
然后分子鉴定转pprI基因阳性烟草植株,并探讨不同辐射剂量胁迫对其生物学的影响,结果表明,PCR检测Km抗性烟草,阳性转化率达到75.4%很高的水平。同时得到转pprI基因烟草表现出较强的辐射抗性,能在400Gy60Co-γ射线辐射处理累计一个月后仍存活。
再次通过60Co-γ射线辐射对进行烟草生理生化影响实验,结果表明转基因和非转基因烟草中可溶蛋白质含量以及SOD、CAT、POD酶活性在不同剂量辐射后总体上表现为先缓慢上升后下降趋势;并且转基因烟草中酶活性表达量明显高于非转基因。
最后通过荧光定量RT-PCR研究,辐射对外源pprI基因在转基因烟草中的表达几乎是没有影响的。同时,与非转基因烟草相比,辐射诱导了转pprI基因烟草中cat、pod、sod这三种保护酶基因的高表达,并且这三种酶活性变化分别与其基因表达的变化一致。结果表明了外源pprI基因提高了阳性烟草植株对辐射的耐受能力。
本文为运用植物修复技术来治理放射性污染奠定了初步的理论基础,同时为60Co-γ射线辐射对主要保护酶基因的表达影响提供了科学的参考依据。