一、抗rhG-CSF噬菌体抗体库的构建和鉴定 目的 构建抗rhG-CSF噬菌体抗体文库，以探索制备rhG-CSF病诊疗用单克隆抗体的新方法。方法用文库构建试剂盒，以健康人外周血淋巴细胞为材料，建立噬菌体抗体文库，并对其进行鉴定。结果 构建完成了一滴度为6.42×10¹⁰cfu／ml的噬菌体抗体库。结论 rhG-CSF噬菌体抗体库的建立为对文库进行进一步的筛选、表达奠定了基础。 二、抗rhG-CSF噬菌体抗体库的筛选和阳性克隆的鉴定 目的 研制rhG—CSF的单链抗体。 方法 用rhG-CSF抗原包板，对己构建的抗rhG-CSF噬菌体抗体库进行3轮富集，然后用ELISA法从富集的次级抗体库中筛选阳性克隆，最后借助ELISA、SDS-PAGE和Western印迹等方法，根据克隆表达产物与其它4种抗原反应的情况，进行特异性鉴定。 结果 从随机挑取的80个克隆中筛选到阳性克隆6个，经交叉筛选和鉴定最终获得特异性抗rh6-CSF阳性克隆2个。 结论 用固相富集和ELISA筛选法可以从抗体库中有效地筛选到抗rhG-CSF的阳性克隆，获得的抗体克隆可用于抗rhG-CSF单链抗体的制备。 三、抗rhG-CSF噬菌体抗体基因结构分析 目的 对获得的抗rhG-CSF的抗体克隆进行基因分析。方法 将2株阳性克隆抗体基因进行测序，并用NCBI和Ig Blast Antibody of Immunoglobulin sequences中的软件，对DNA序列和由其推导的氨基酸序列进行分析，并对其二级结构进行了模拟。结果 G9和G32阳性克隆抗体基因的长度分别为708bp和732bp，轻链和重链可变区基因与人免疫球蛋白基因有高度的同源性。推导的氨基酸序列具有典型的抗体轻、重链可变区特征。对2株克隆抗体基因二级结构进行模拟，结果显示以β-折叠和转角为主的平行肽链形成片层样结构，均符合抗体的基本构型。结论 G9、G32阳性克隆外源基因均属于人免疫球蛋白可变区基因。