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目的:
1、制备出小批量性质稳定的肝素修饰的脂质微泡,并对其质量进行初步评价。
2、探讨肝素修饰的脂质微泡对正常大鼠心肌灌注效果。
3、建立一种理想的急性心肌梗塞大鼠模型,探讨肝素修饰的脂质微泡对缺血心肌灌注研究的可行性和准确性。
4、以酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)为模型药物,运用超声爆破微泡介导技术研究aFGF治疗大鼠心肌缺血,探讨其促进大鼠缺血心肌血管新生的可行性,为肝素结合生长因子类药物治疗冠心病提供一个新的途径和手段。
方法:
1、应用自制肝素-泊洛沙姆复合材料对脂质微泡进行表面修饰,将磷脂材料、乳化剂(吐温-80)、冻干支撑剂(Poloxamer188)、自制肝素-泊洛沙姆按照一定比例经冷冻干燥法制备成肝素修饰化脂质微泡,并对脂质微泡冻干粉形态及复溶性、微泡浓度、脂质微泡形态、脂质微泡粒径及粒径分布等指标进行质量评价。
2、运用造影数据相关分析软件,对正常大鼠心肌超声造影图像所获参数始增时间、峰值时间、峰值强度进行时间-强度曲线定量分析,评估心肌超声造影参数的准确性。
3、通过SD大鼠心梗前和心梗后,以及连续4周的超声经胸追踪观察,以超声技术评价心梗大鼠心功能的结果作参考,分析了心梗大鼠与假手术组大鼠在心功能等临床参数上的差别;通过时间-强度分析软件对缺血心肌超声造影图像进行增强时间、峰值时间和峰值强度定量分析。
4、通过超声介导酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)治疗心肌缺血大鼠并观察疗效,于药物治疗4周后处死大鼠,免疫组织化学法(IHC)检测缺血心肌周围CD34的表达,并在显微镜下计数心肌内新生微血管密度(Microvesseldensity,MVD)。
结果:
1、实验结果筛选得出:肝素-泊洛沙姆可用于制备脂质微泡;当磷脂材料、乳化剂、冻干支撑剂比例为2:5:50时,HP与Poloxamer188的质量比1:19时,脂质微泡的质量最好。优选出的肝素修饰的脂质微泡具有良好的外观及复溶性,脂质微泡浓度可达3.5×108个/ml,90%以上粒径在2~8μm,微泡稳定性良好。
2、正常大鼠心肌部位显影参数平均结果:始增时间是4.4s,峰值强度59.1dB、峰值时间5.1s。
3、造模后心肌缺血大鼠体表心动图ST段明显抬高,出现大范围的心肌缺血心电图改变;造模4周后行超声检查,心肌缺血大鼠心脏室壁变薄、心腔扩大,M型超声心动图示室壁运动减弱,左心收缩功能指标EF明显降低;病理组织学检查可见心肌缺血大鼠心肌变性、坏死,缺血区被纤维组织替代填充。心梗组大鼠与假手术组大鼠比较:始增时间、峰值强度、峰值时间均有统计学意义(P<0.05)。
4、IHC结果显示,CD34定位于血管内皮细胞胞膜和胞浆,显示为棕黄色或棕褐色颗粒,新生的微血管被染成棕黄色,显微镜下计数每高倍镜视野下的MVD,结果表明在US+MB+aFGF组心肌中MVD最高,为266.9士39.83(个/高倍镜视野),与其它各组相比较均有显著性差异((P<0.01)。
结论:
1、采用冷冻干燥法可成功制备肝素修饰的脂质微泡,其粒径大小符合静脉注射要求。
2、应用超声显像技术观察全过程,体内造影显示该微泡能够有效增强大鼠心肌实质回声,肝素修饰的脂质微泡可作为造影剂具有心肌显影的可行性。
3、确定了结扎冠状动脉左前降支的方法并成功制各了大鼠心肌缺血模型,建立了常规超声测量、病理组织形态学等一系列综合评价心肌缺血模型的指标。该模型具有可重复性和容易操作等特点,在冠心病心肌缺血研究和新药开发方面具有广泛的应用前景。
4、超声微泡可介导aFGF在缺血心肌内的高效转移并促进血管新生,为肝素结合生长因子(HBGF)类药物治疗缺血心肌提供一个新的措施。